[发明专利]用于使用N-末端截短的β-半乳糖苷-α-2,6-唾液酸转移酶变体的糖蛋白的单-和二唾液酸化的方法

权利要求书

1.一种组合物，其包含允许糖基转移酶活性的水性缓冲液，所述组合物进一步包含：

(a)糖基化的目标分子，所述目标分子选自糖蛋白和糖脂，所述目标分子包含多个触角，所述触角中的至少两个各自具有作为末端结构的在半乳糖基残基中的C6位置具有羟基的β-D-半乳糖基-1,4-N-乙酰基-β-D-葡糖胺部分；

(b)SEQIDNO:2的N-末端截短的人β-半乳糖苷-α-2,6-唾液酸转移酶I(Δ89hST6Gal-I)；

(c)SEQIDNO:3的N-末端截短的人β-半乳糖苷-α-2,6-唾液酸转移酶I(Δ108hST6Gal-I)；

(d)作为唾液酸转移酶催化的反应的供体化合物的胞苷-5’-单磷酸-N-乙酰神经氨酸。

2.根据权利要求1的组合物，其中所述目标分子是选自糖基化的细胞表面蛋白、糖基化的蛋白信号传导分子、糖基化的免疫球蛋白和糖基化的病毒来源的蛋白的糖蛋白。

3.根据权利要求1和2中任一项的组合物，其中Δ89hST6Gal-I和Δ108hST6Gal-I各自以预定量存在。

4.根据权利要求3的组合物，其中Δ89hST6Gal-I和Δ108hST6Gal-I的各自量具有预定的酶促活性。

5.根据权利要求1至4中任一项的组合物的用途，其用于在体外和允许糖基转移酶酶促活性的条件下产生具有添加至目标分子的一个或多个触角末端结构的一个或多个唾液酸残基的唾液酸化目标分子。

6.根据权利要求5的用途，其为根据权利要求3或权利要求4的组合物用于体外产生具有受控量的添加至目标分子的一个或多个触角末端结构的唾液酸残基的唾液酸化目标分子的用途。

7.根据权利要求5和6中任一项的用途，其中Δ89hST6Gal-I催化二-唾液酸化的目标分子或更高唾液酸化的目标分子的形成，且Δ108hST6Gal-I催化单唾液酸化的目标分子的形成。

8.用于体外产生具有受控量的添加至目标分子的一个或多个触角末端结构的唾液酸残基的唾液酸化目标分子的方法，所述目标分子选自糖蛋白和糖脂，所述目标分子包含多个触角，所述触角中的至少两个各自具有作为末端结构的在半乳糖基残基中的C6位置具有羟基的β-D-半乳糖基-1,4-N-乙酰基-β-D-葡糖胺部分，所述方法包括以下步骤：

(a)提供根据权利要求3或权利要求4的组合物；

(b)在允许糖基转移酶酶促活性的条件下且持续预定时间间隔温育步骤(a)的组合物，从而形成末端触角N-乙酰神经氨酰基-α2,6-β-D-半乳糖基-1,4-N-乙酰基-β-D-葡糖胺残基，其中?89hST6Gal-I催化双唾液酸化目标分子的形成，且?108hST6Gal-I催化单唾液酸化目标分子的形成，

从而体外产生具有受控量的添加至目标分子的一个或多个触角末端结构的唾液酸残基的唾液酸化目标分子。

9.根据权利要求8的组合物，其中所述目标分子与Δ89hST6Gal-I和Δ108hST6Gal-I在相同容器中和相同条件下同时温育。

10.根据权利要求9的方法，其中Δ89hST6Gal-I催化二-唾液酸化的目标分子或更高唾液酸化的目标分子的形成，且Δ108hST6Gal-I催化单唾液酸化的目标分子的形成。

11.根据权利要求10的方法，其中Δ108hST6Gal-I酶促活性的量相对于Δ89hST6Gal-I酶促活性的量更高导致形成单唾液酸化的目标分子的可能性与形成二-或更高唾液酸化的目标分子的可能性相比增加。

12.根据权利要求8至11中任一项的方法，其中所述目标分子不含作为触角末端结构的唾液酸残基。

13.根据权利要求12的方法，其中所述目标分子是IgG类的单克隆抗体，具体地选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。

14.糖基化的目标分子的制备物，所述目标分子为IgG亚类的免疫球蛋白分子，其中所述制备物中的单和双唾液酸化的目标分子的量是受控量，所述制备物通过根据权利要求8至13中任意的方法获得。