[发明专利]使用合成信使RNA无饲养层衍生人诱导多能干细胞

权利要求书

1.一种对体细胞进行去分化或重编程的方法，其包括：用组合物 转染分离的体细胞，所述组合物包含：

有效量的在选自Oct4、Sox2、Klf4、cMyc、Nanog和Lin28的任 意一种或多种合成mRNA重编程因子与反式激活结构域之间形成的融 合产物，由此体细胞被重编程或去分化。

2.权利要求1的方法，其中对所述合成mRNA进行纯化以从转录 中除去任何污染性非mRNA。

3.权利要求1的方法，其中所述细胞以密度梯度接种在孔内。

4.权利要求1的方法，其中所述细胞是非人灵长类动物细胞。

5.权利要求1的方法，其中所述细胞是食蟹猴细胞。

6.权利要求1的方法，其中所述细胞是恒河猴细胞。

7.权利要求1的方法，其中所述细胞是狒狒细胞。

8.权利要求1的方法，其中所述细胞是犬细胞。

9.权利要求1的方法，其中所述细胞是马细胞。

10.权利要求1的方法，其中所述细胞是牛细胞。

11.权利要求1的方法，其中所述细胞是猪细胞。

12.权利要求1的方法，其中所述细胞是绵羊细胞。

13.权利要求1的方法，其中所述组合物包括融合到N-末端MyoD 反式激活结构域的Oct4。

14.权利要求2的方法，其中Oct4融合到三倍串联形式的N-末端 MyoD反式激活结构域。

15.对哺乳动物细胞进行重编程的方法，其中所述方法包括：

在标准6孔板中在无饲养层表面上以2.5万到25万细胞每孔的密 度生长靶细胞；和

用权利要求1的重编程因子的合成mRNA中的任意一种或多种以 约50ng/ml到约800ng/ml的剂量转染所述细胞。

16.权利要求4的方法，其中所述方法包括：

在标准6孔板中在无饲养层表面上以5万、7.5万、10万、或15 万细胞每孔的密度生长靶细胞；和

用权利要求1的重编程因子的合成mRNA中的任意一种或多种以 约50ng/ml到约800ng/ml的剂量转染所述细胞，其中在较早的时间点 比较晚的时间点使用较低的剂量；以及无需传代而获得iPSC。

17.权利要求4的方法，其中所述方法包括：

在标准6孔板中在无饲养层表面上以选自1.5万、3万、5万、7.5 万、10万、15万、25万、50万细胞每孔的任何一个的密度生长靶细 胞；其中每个孔的体积调整到合适培养基的0.5ml到5ml之间；以及

用权利要求1的重编程因子的合成mRNA中的任意一种或多种以 约50ng/ml到约800ng/ml的剂量转染细胞，其中在较早的时间点比较 晚的时间点使用较低的剂量；以及

无需传代细胞而获得iPSC。

18.权利要求4的方法，其中所述哺乳动物细胞是人细胞。

19.权利要求4的方法，其中所述方法无异种。

20.权利要求1的方法，其中所述一种或多种因子选自mRNA、 调控RNA、siRNA、miRNA、及其组合。

21.权利要求1的方法，其中使用至少两种不同的RNA转染所述 体细胞。

22.权利要求1的方法，其中所述体细胞选自单能细胞、专能细 胞、多能细胞、和分化细胞。

23.权利要求1的方法，其中所述一种或多种RNA诱导所述体细 胞去分化为单能细胞、专能细胞、或多能细胞。

24.权利要求4的方法，其中至少一种所述因子选自OCT4mRNA、 SOX2mRNA、NANOGmRNA、LIN28mRNA、KLF4mRNA和MYC mRNA。