[发明专利]T淋巴细胞中类肝素酶的表达

说明书

本发明要求2013年3月5日提交的美国临时专利申请系列第61/772,591号的优先权，其通过引用全文纳入本文。

关于联邦资助的研究或开发的声明

本发明在NCI/NIH资助的R01CA142636-01以及国防部资助的PR093892和W81XWH-10-10425下由政府支持完成。政府对本发明拥有某些权利。

技术领域

本发明的实施方式至少涉及细胞治疗、免疫治疗、分子生物学、细胞生物学和医学，包括癌症医学的领域。

背景技术

基于T细胞疗法对癌症患者的临床功效已经由旨在通过嵌合抗原受体(CAR)或异位α-和β-TCR链的表达重新定向其抗原特异性的遗传修饰而显著增加(Pule等，2008；Kalos等，2011；Morgan等，2006)。虽然这些肿瘤导向性的T细胞已经成为淋巴肿瘤的高效治疗手段，甚至是在有显著肿瘤负担的患者中也是如此(Kalos等，2011；Rooney等，1995)，但是它们的效果在实体瘤如神经母细胞瘤(NB)(Pule等，2008)中一般较不显著，尤其是当患者有较大的肿瘤负担时。这一限制可能部分是由于活性肿瘤免疫逃逸策略(Zou，2005)，但是由于培养过程本身带来的功能变化可能降低了离体培养的T细胞的肿瘤渗透。

CAR-工程改造的T细胞疗法大多数是效应T细胞和效应记忆T细胞，除了它们的强力的效应功能以外(Pule等，2008；Kalos等，2011；Savoldo等，2011)，这些细胞需要保留在肿瘤位点处通行并聚集的能力。这类性质包括复杂的一系列相互作用，包括T细胞粘附于内皮细胞和趋化因子-趋化因子受体相互作用，其随后调节T细胞侵入抗原富集组织(Muller，2003；Parish，2006；Yadac等，2003)。在这一过程中，T淋巴细胞在生理上降解皮下基底膜(BM)和胞外基质(ECM)的主要组分，包括硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)，其与广泛种类的细胞的膜相关联(Berfield等，1999)。对于实体瘤的有效治疗而言，也需要T细胞降解HSPG的这一过程，由于ECM是肿瘤微环境的关键组分。

ECM降解的基础是T细胞释放降解酶，其中类肝素酶(HPSE)似乎是最为重要的酶之一。HPSE是仅有的已知能够切割HSPG的硫酸乙酰肝素(HS)链的哺乳动物β-D-内切糖苷酶(Parish，2006；deMestre等，2007；Vlodavsky等，2007；Yurchenco和Schittny，1990)。HPSE首先合成为约65kDa的无活性前体蛋白，然后被切割成约8kDa和约50kDa的两个蛋白亚基，其异二聚化形成活性HPSE蛋白(Vlodavsky等，2007)。HPSE也对炎症有主要贡献，并且似乎由激活的CD4⁺T淋巴细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞和B淋巴细胞大量产生(Fridman等，1987；Naparstek等，1984；Vlodavsky等，1992)。与在T淋巴细胞促进组织渗透中的这一作用相一致，HSPE在实验性自体免疫脑脊髓炎(deMestre等，2007)和关节炎(Parish，2006)中起到关键作用。

虽然HPSE已经显示涉及炎症，其对肿瘤位点处介导T-细胞渗透的贡献仍然未明。在过继转移之前的T细胞操作会对该酶的产生有什么影响也是未知的。本发明满足了本领域中对增强治疗性细胞，如离体扩增的细胞对癌症如实体瘤有效的能力的需求。

概述

本发明涉及与细胞疗法相关的方法和组合物。在具体的实施方式中，细胞疗法用于对细胞疗法有需求的个体，如哺乳动物，包括人。细胞疗法可适用于任何医学条件，虽然在具体实施方式中，该细胞疗法是用于癌症。癌症可以是任意类型，虽然在具体实施方式中，癌症包括个体中的一种或多种实体瘤；该实体瘤可以是两性的或恶性的。个体可以是任意年龄或性别。在具体实施方式中，个体已知患有癌症、处于患有癌症的风险中、或者易于患有癌症。癌症可以是原发性癌症或转移性癌症，并且癌症可能难以治疗。在具体实施方式中，癌症涉及实体瘤的治疗，例如，乳腺癌、肺癌、脑癌、结肠癌、肾癌、前列腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、骨癌、宫颈癌、脾癌、肛门癌、食道癌、头颈癌、胃癌、胆囊癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、淋巴瘤、骨髓瘤等。在替代性实施方式中，本发明涉及非实体瘤的治疗，如白血病。