[发明专利]用于重组人分泌球蛋白的改进方法

说明书

提供了分泌球蛋白SCGB1A1、SCGB3A2和SCGB3A1的合成、配制和使用方法。分泌球蛋白SCGB1A1、SCGB3A2和SCGB3A1用于作为治疗剂以影响长期患者治疗效果的方法，例如提供了防止需要医疗干预包括住院基本条件的严重呼吸加重的方法。提供了重组人分泌球蛋白生产方法、分析方法、药物组合物及用于防止急性和慢性呼吸系统疾病的长期后遗症的方法。

技术领域

本发明涉及药物组合物、生产方法、分析方法、及包括SCGB1A1(CC10)、SCGB3A1和SCGB3A2的分泌球蛋白的使用方法。这些分泌球蛋白新的生理作用和治疗用途已经确定。具体而言，本发明涉及使用rhCC10、rhSCGB3A2和rhSCGB3A1预防或延缓由于严重呼吸加重经过长达10个月治疗疗程而住院治疗的新方法。本发明还涉及rhSCGB3A2新的稳定的具有抗炎性质的生产方法和药物组合物。更具体地说，本发明进一步提供了一种通过施用rhCC10防止严重呼吸加重的方法。本发明进一步提供了一种通过施用rhSCGB3A2治疗支气管扩张和预防支气管扩张加重的方法。甚至更具体地，本发明提供了一种通过施用rhCC10、rhSCGB3A2或rhSCGB3A1在慢性肺病中逆转气道重塑及在急性肺损伤中防止气道重塑的方法。甚至更具体地，这些分泌球蛋白间接通过修复克拉拉细胞(clara cell)正常数及其相关结构修改气道重塑，在气道上皮细胞被称为神经上皮组织(又名NEBs)或神经内分泌细胞簇(又名NECs)，其通过它们对抗CGRP1抗体的免疫反应性鉴定。克拉拉细胞和其它CGRP1+细胞，然后分泌这些分泌球蛋白和正常粘膜环境的其他成分，有助于呼吸道粘膜和上皮细胞的动态平衡和正常功能，然后更耐没有遇到严重加重的吸入挑战。

发明背景

天然人克拉拉细胞10kDa蛋白(CC10)、也被称为子宫珠蛋白、克拉拉细胞16kDa蛋白(CC16)、克拉拉细胞分泌蛋白(CCSP)、胚激肽、尿蛋白-1和分泌球蛋白1A1(SCGB1A1)，是被认为在所有脊椎动物中存在的被称为分泌球蛋白的相关蛋白质的一个族。有两个额外在呼吸道以非常高的浓度表达的分泌球蛋白，称为SCGB3A1和SCGB3A2(Porter,2002)。SCGB1A1、SCGB3A1、和SCGB3A2这三种蛋白质在本文中称为“呼吸分泌球蛋白”。表1示出了每个呼吸分泌球蛋白的基因库位点和氨基酸序列。

表1：呼吸分泌球蛋白

哺乳动物分泌球蛋白的主要来源是肺和气管上皮细胞，尤其是无纤毛支气管气道上皮细胞(主要是克拉拉细胞)，及他们在成人肺的细胞外液中是非常丰富的局部产生的蛋白质。它们也在鼻腔上皮细胞中分泌。因此，呼吸分泌球蛋白在上呼吸道和下呼吸道中都有高度表达；上呼吸道包括鼻腔和鼻窦及下呼吸道包括气管，支气管和肺部肺泡。在血清和尿液中也存在数量可观的呼吸分泌球蛋白，其在很大程度上是来自于肺源。SCGB3A1也在胃、心脏、小肠、子宫和乳腺表达，及SCGB3A2在甲状腺以一个较低的浓度表达(Porter,2002)。CC10也由生殖组织(子宫、精囊)、外分泌腺(前列腺、乳腺、胰腺)、内分泌腺(甲状腺、垂体、肾上腺和卵巢)以及由胸腺和脾脏产生(Mukherjee,1999；Mukherjee,2007)。人CC10体内的主要可收回形式是同型二聚体，由两个相同的70个氨基酸的单体组成，具有4.8的等电点。虽然它在SDS PAGE上以约10kDa的表观分子量迁移，但是其分子量为15.8kDa。单体以反向平行构型排列，具有与其它C-末端相邻的N-末端，及以完全氧化形式的二聚体，单体通过两个二硫键连接(Mukherjee,1999)。然而，SCGB3A2的人样品中的体内分子形式(单体，二聚体，或其它络合物)尚未表征。虽然迄今为止还没有报道描述成功地合成人SCGB3A1和SCGB3A2及这些蛋白质在体外的生化表征，但是这三种呼吸分泌球蛋白都可以通过合成(Nicolas,2005)或重组方法(Mantile,1993)得到。