[发明专利]在重组宿主中有效产生甜菊醇糖苷

权利要求书

1.能够在细胞培养物中产生甜菊醇糖苷的重组微生物，其中所述微生物具有对至少一种内源转运蛋白基因的表达修饰，

其中所述表达修饰包括与相应缺少修饰的微生物中观察的表达或活性水平相比，SEQID NO：148或149所示核苷酸序列的至少一种所述内源转运蛋白基因或者编码SEQ ID NO：104、113或122中任一个所示的氨基酸序列的多肽的至少一种所述内源转运蛋白基因的表达增加，或者通过破坏或缺失各自基因座来使编码SEQ ID NO：107、108、111或113中任一个所示的氨基酸序列的多肽之基因的降低表达；

其中所述甜菊醇糖苷是莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷B、莱鲍迪苷D、莱鲍迪苷E、莱鲍迪苷M、或其组合。

2.根据权利要求1所述的重组微生物，其中所述内源转运蛋白基因编码ATP-结合盒(ABC)转运蛋白或主要易化子超家族(MFS)转运蛋白。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的重组微生物，其还包含：

(a)编码蔗糖转运蛋白(SUC1)多肽和蔗糖合酶(SUS1)多肽的一个或更多个基因，

其中所述SUS1多肽为SEQ ID NO：78或80所示的氨基酸序列的多肽；

(b)编码能够由法尼基二磷酸(FPP)和异戊烯基二磷酸(IPP)合成牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸(GGPP)的多肽的基因，

其中所述多肽为SEQ ID NO：43-50中任一个所示的氨基酸序列的多肽；

(c)编码能够由GGPP合成内部-柯巴基二磷酸的多肽的基因，

其中所述多肽为SEQ ID NO：33-39中任一个所示的氨基酸序列的多肽；

(d)编码能够由内部-柯巴基焦磷酸合成内部-贝壳杉烯的多肽的基因，

其中所述多肽为SEQ ID NO：1-6中任一个所示的氨基酸序列的多肽；

(e)编码能够由内部-贝壳杉烯合成内部-贝壳杉烯酸的多肽的基因，

其中所述多肽为SEQ ID NO：7-10中任一个所示的氨基酸序列的多肽；

(f)编码能够由内部-贝壳杉烯酸合成甜菊醇的多肽的基因，

其中所述多肽为SEQ ID NO：11-17或19中任一个所示的氨基酸序列的多肽；

(g)编码能够还原细胞色素P450复合物的多肽的基因，

其中所述多肽为SEQ ID NO：20、22、27或28中任一个所示的氨基酸序列的多肽；

并且还包含：

(h)编码能够在其C-13羟基处使甜菊醇或甜菊醇糖苷糖基化的多肽的基因，

其中所述多肽为SEQ ID NO：30或91所示的氨基酸序列的多肽；

(i)编码能够使甜菊醇糖苷之13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C3’进行β1，3糖基化的多肽的基因，

其中所述多肽为SEQ ID NO：85或89所示的氨基酸序列的多肽；

(j)编码能够在其C-19羧基处使甜菊醇或甜菊醇糖苷进行糖基化的多肽的基因，

其中所述多肽为SEQ ID NO：29或88所示的氨基酸序列的多肽；和/或

(k)编码能够使甜菊醇糖苷之13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C2’进行β1，2糖基化的多肽的基因，

其中所述基因具有2个或更多个拷贝数；并且

其中所述多肽为SEQ ID NO：51、54、55、86或90中任一个所示的氨基酸序列的多肽；

其中(a)-(k)中的至少一个所述基因是重组基因。

4.根据权利要求3所述的重组微生物，其中部分(a)-(k)中的至少一个所述基因针对在权利要求1所述的重组微生物中表达而进行了密码子优化，其中所述基因针对在所述微生物中表达而进行了密码子优化。

5.根据权利要求4所述的重组微生物，其中所述基因针对在酿酒酵母中表达而进行了密码子优化。