[发明专利]一种从西红花中分离纯化西红花酸单体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从植物中分离与纯化化合物单体的方法，具体涉及一种从西红花中提取分离及纯化西红花酸单体的方法，属于化合物单体的分离纯化技术领域。

背景技术

西红花为鸢尾科植物番红花的干燥柱头。多年生草本植物，高10-15cm，叶线形。花顶生，花被6，淡紫色，长4-6cm，雄蕊3，雌蕊1，子房下位，花柱细长，黄色柱头3，伸出花被筒外后下垂，深红色，顶端略膨大。蒴果。性微寒，味甘。能活血化瘀、凉血解毒、解郁安神。用于治疗经闭、产后淤阻、温毒发斑、忧郁痞闷、惊悸发狂等病症。

西红花酸在西红花药材中含量很少，而西红花苷系类在西红花药材中含量较多，如何才能得到大量的较高纯度的西红花酸，通过对西红花酸与西红花苷系类的结构式进行比较发现，西红花苷系类化合物为西红花酸的结构上接了一些不同数目的葡萄糖，那么通过转化酶解掉葡萄糖就可以得到含量较少的西红酸，西红花酸结构式如下:

发明人通过检索大量文献发现，目前只有从栀子中提取制备分离西红花酸的报道，相关专利申请如下：

中国专利CN103641705A提供了一种从栀子果实中提取西红花酸的方法，按以下步骤进行：将栀子粉碎后加入水溶剂提取，将提取溶液浓缩后加入乙醇沉淀，过滤沉淀后，再加入乙醇低温放置，过滤；过滤的沉淀用水溶解上HPD-300大孔树脂进行吸附，以乙醇、水和冰醋混溶的洗脱液对树脂柱进行洗脱，洗脱液浓缩后放入一定量饱和食盐水中，低温结晶、离心、干燥，得到西红花酸单体。但是其纯度在95%左右，无法达到对照品的使用条件。

另外，中国专利CN101863754A公开了一种西红花酸、栀子黄色素和西红花色素的制备方法，包括以下步骤：栀子属果实通过酸水提取栀子黄色素后或果实原料直接用碱水提取，水液酸化后用乙酸乙酯萃取得到西红花粗品，粗品用不同溶剂重结晶得到西红花酸纯品；西红花药材、西红花组织培养液酸水提取西红花色素后或直接用碱水提取，水液酸化后用乙酸乙酯萃取得到西红花酸粗品，粗品用不同溶剂重结晶得到西红花酸纯品。实施例一中还具体公开了：将栀子属果实粉碎后加入碱水（用NaOH等调至pH≈10），加热提取得提取液Ⅰ，提取液Ⅰ用盐酸等调至pH≈3，然后用乙酸乙酯、乙醚等萃取得到萃取液Ⅱ，萃取液Ⅱ浓缩产生沉淀，过滤得到西红花酸粗品，西红花酸粗品用不同浓度的甲醇、乙醇、四氢呋喃、碱水等重结晶即得西红花酸纯品，纯度大于99%。但是该方法存在明显的缺陷：1）在制备过程中采用了强酸强碱，对环境造成一定影响；2）药材提取后提取液量大，使得萃取液用量也相应增大，不宜操作；3）结晶条件太复杂，不易具体实施；3）产品收率不高。

发明内容

本发明旨在提供一种从西红花中分离纯化西红花酸单体的方法，以解决从西红花药材中快速获得高纯度西红花酸单体的技术难题。该方法操作简便，生产周期短，工艺稳定，成本易控制，对环境无污染，可实现较大量西红花酸单体的高纯度分离制备，且得到的西红花酸单体纯度高达99%以上，可作为含量测定的对照品使用。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种从西红花中分离纯化西红花酸单体的方法，包括如下工艺步骤：

（1）提取

取西红花药材，加入体积百分比浓度为95%的乙醇溶液，加入量按照药材重量:乙醇溶液体积=1Kg:10L计算，室温浸泡提取3-4次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；

95%的乙醇溶液可将西红花苷浸泡出来，而一些极性的杂质则被保留在药材中。

（2）浓缩

将步骤（1）收集、合并的滤液，旋蒸减压回收乙醇，浓缩后的固体转移至容器中50℃鼓风干燥5-8小时，得浓缩至干固体，待下一步处理；

滤液经浓缩后的固体中主要为西红花苷系列化合物。

（3）酶解转化

取步骤（2）干燥后的固体，并与纤维素酶以质量比1:1加入到pH5.2的醋酸-醋酸钠缓冲液中，然后置于温度50℃、频率60r/min的水浴恒温振荡器中转化反应24-36小时，反应完成后放置至室温，转化物析出并沉淀；所述醋酸-醋酸钠缓冲液的体积用量为干燥固体质量的30倍。

此过程主要是利用纤维素酶中的β-葡萄糖苷酶以酶解西红花苷中的葡萄糖，从而得到西红花酸；同时酶在50℃和弱酸条件下最活泼，酶解反应也越快。

（4）固体过滤、干燥

将步骤（3）酶解转化后的沉淀用滤纸过滤，固体放入鼓风干燥箱中50℃干燥5-8小时至干；

（5）DMF结晶、过滤