[发明专利]一种高产角鲨烯的类酵母菌及其应用

说明书

本发明涉及海洋微生物的应用技术，具体涉及一种海洋类酵母菌SD301菌株及利用其高密度发酵生产角鲨烯的方法。类酵母菌分类命名为类酵母菌(Pseudozyma sp.),已保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No：9687，保藏日期为2014年9月19日。所述类酵母菌在发酵生产角鲨烯中的应用。采用本发明的方法获得的角鲨烯纯度达到90％以上，整套工艺操作方便，降低了成本，适合工业化生产。

技术领域

本发明涉及海洋微生物的应用技术，具体涉及一种海洋类酵母菌SD301菌株及利用其高密度发酵生产角鲨烯的方法。

背景技术

角鲨烯(squalene)是一种脂质不皂化物，其化学名称为2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，属开链三萜，具有提高体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、增强机体免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种生理功能，是一种无毒性的具有防病治病作用的海洋生物活性物质,并广泛应用于医药、美容、化妆品、食品等各个领域。目前角鲨烯的来源主要是鱼油，尤其是鲨鱼肝油。但随着渔业资源的日益枯竭及相关法规的日臻完善，促使人们努力寻找其它的角鲨烯来源，如从橄榄油、棕榈油、其他油类作物，或者从苋属植物、种籽、米糠、小麦胚芽中进行提取分离，但角鲨烯在植物中含量极低，大约以重量计算占比为0.1到0.7％。

另一种替代方案是利用微生物发酵的方法来生产角鲨烯。如专利CN 102787074A、CN 103748212 A公布了一株产角鲨烯的类酵母菌株其干菌体中角鲨烯的质量百分含量为1％；专利CN 102666837 A利用解脂耶氏酵母生产出角鲨烯质量含量占胞内总脂质的2％；而专利CN 103266137 B则利用转基因大肠杆菌生产角鲨烯。但是这些专利共同的缺陷是单位发酵体积内角鲨烯的产量都远低于1g/L。在文献报道中，利用微生物发酵生产角鲨烯的产率则更低，如破囊壶菌ACEM 6063菌株角鲨烯产量大约为0.1毫克/克生物量(参见勒维斯等人《新生物技术》，2001年，第439-447页。)，而Schizochytrium mangrovei FB1菌株的产量大约为0.162毫克/克生物量(参见：江等人，《农业和食品化学杂志》，2004年，第52期，页数1196至1200)，而Aurantiochytrium BR-MP4-A1菌株的产量大约为0.18毫克/克生物量(参见：李等人，《农业和食品化学杂志》，2009年，第57期，页数4267至4272)，而常等人分离到的类酵母菌Pseudozyma sp.JCC 207菌株其生产角鲨烯的能力最高，仅为340.52毫克/升发酵液。因此，筛选高角鲨烯产量的微生物是解决目前生物发酵法生产角鲨烯行业关键瓶颈的有效手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种高产角鲨烯的类酵母菌及其应用。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种高产角鲨烯的类酵母菌，类酵母菌分类命名为类酵母菌(Pseudozyma sp.),已保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No：9687，保藏日期为2014年9月19日。

一种高产角鲨烯的类酵母菌的应用，所述类酵母菌在发酵生产角鲨烯中的应用。

一种高密度发酵生产角鲨烯的方法，以CGMCC No：9687菌株为出发菌株，在液体培养基中高密度发酵，分离得到菌体细胞，将菌体细胞经破碎、萃取、精制获得角鲨烯。

具体为：

①将保存在甘油管的菌株接种于种子培养基中,接种量3-5％(v/v)，在20-30℃，以150-200rpm的转速，培养24-48h，获得一级种子；

②将一级种子接入种子培养基中，接种量3-5％(v/v)，在20-30℃，以150-200rpm的转速，培养24-48h，获得二级种子；