[发明专利]嗜烟碱节杆菌WYG001及其在制备N-BOC-L-高丝氨酸内酯中的应用

权利要求书

1.嗜烟碱节杆菌(Arthrobacter nicotinovorans)WYG001，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M 2014054，保藏日期2014年2月28日，保藏地址为中国，武汉，武汉大学，邮编430072。

2.一种权利要求1所述嗜烟碱节杆菌WYG001在制备N-BOC-L-高丝氨酸内酯中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用为：以嗜烟碱节杆菌WYG001经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体冷冻干燥后的干菌体为催化剂，以N-BOC-DL-高丝氨酸内酯为底物，以0.1M、pH7.0磷酸缓冲液为反应介质，在20～50℃、200rpm条件下进行转化反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得N-BOC-L-高丝氨酸内酯。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述催化剂的制备方法为：

(1)斜面培养：将嗜烟碱节杆菌WYG001接种至斜面培养基，30℃培养24h，获得菌体斜面；每升斜面培养基组成：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂20g，pH 7.0-7.2，加水至1000mL；121℃灭菌20min；

(2)种子培养：从斜面菌体挑取一接种环菌体接种至种子培养基，在30℃、200r/min培养24h，获得种子液；种子培养基组成：蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，NaCl 10g/L，溶剂为水，pH 7.0；

(3)发酵培养：在无菌条件下，以体积浓度6-8％的接种量将种子液接种于产酶培养基中，30℃、200r/min培养24h，获得发酵液，培养结束后将发酵液12000rpm离心10min，弃上清液，得到嗜烟碱节杆菌WYG001湿菌体；产酶培养基组成为：乳糖5-15g/L，酵母膏10-14g/L，NaCl 10g/L，MgSO₄0.22g/L、KH₂PO₄0.136g/L，溶剂为水，pH 7.0；

(4)取步骤(3)湿菌体以1.2g/ml的量加入pH 7.0、0.1mol/L的磷酸盐缓冲液中，搅拌均匀，-80℃条件下冷冻干燥，得到干菌体。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述湿菌体的用量以缓冲液体积计为3～150g/L。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述干菌体的用量以缓冲液体积计为1～50g/L。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述底物初始浓度为1～100g/L。

8.如权利要求3所的应用，其特征在于所述反应液分离纯化的方法为：反应结束后，将反应液离心，取上清液，加入等体积的乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层减压蒸馏至干脱除溶剂，得到N-BOC-L-高丝氨酸内酯。

9.如权利要求3所的应用，其特征在于所述反应在20～50℃反应1～30h。

10.如权利要求4所的应用，其特征在于产酶培养基组成为：乳糖10g/L，酵母膏12g/L，NaCl 10g/L，MgSO₄0.22g/L、KH₂PO₄0.136g/L，溶剂为水，pH 7.0。