[发明专利]血样中微量伊马替尼测定方法及在零期临床试验中的应用

权利要求书

1.测定生物样品中伊马替尼或其药用盐的方法，该方法使用高效液相色谱-串联质谱进行测定，并且包括以下步骤和测试条件：

(1)测试样品的处理：

取100μL含药生物样品于1.5mL管中，加20μL甲醇，加入20μL内标溶液(300ng/mL)，涡旋混匀，加入100μL甲醇和200mL乙腈，涡旋50秒，于4℃14000rpm离心5min，取上清液200μl转移至1.5mL进样瓶中，作为测试样品待检测；

(2)试样测定：

取20μL测试样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中的伊马替尼和内标的色谱峰，并据此计算所述生物样品中的伊马替尼的浓度；

(3)液相色谱条件：

色谱柱：Phenomene C18 100A柱(3.0×50mm)；流动相：乙腈(含0.1％甲酸)：水(含2mmol/L乙酸铵和0.1％甲酸)，梯度洗脱(5：95，1min；90：10，3.5min；90：10，4min；5：95，4.1min；5：95，6min)，流速：0.4mL/min，进样量：20μL；

(4)质谱条件：

离子源：离子喷雾离子化源；离子喷射电压：5500V；温度：550℃；源内气体1(GS1，N2)压力：50psi；源内气体2(GS2，N2)压力：50psi；气帘气体(N2)压力：20psi；正离子方式检测；扫描方式：选择离子反应监测(MRM)方式；用于定量分析的离子反应分别为m/z494.3→m/z394.1(伊马替尼)和m/z 408.2→m/z235.0(MK0431，内标)。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项：

所述伊马替尼的药用盐选自甲磺酸伊马替尼、盐酸伊马替尼、磷酸伊马替尼、甲苯磺酸伊马替尼；

所述生物样品选自血浆、尿液、唾液等；

所述含药生物样品中包含的伊马替尼的浓度低于100ng/ml，例如低于75ng/ml，例如低于50ng/ml；

所述高效液相色谱-串联质谱能够检测到的含药生物样品中的伊马替尼的浓度高于0.1ng/ml，例如高于0.2ng/ml，例如高于0.3ng/ml，例如高于0.4ng/ml；

所述内标是西格列汀。

3.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项：

所述“(1)测试样品的处理”中，所添中的20μL甲醇中包含有机酸；

所述有机酸选自酒石酸、枸橼酸、马来酸、苹果酸、富马酸；

所述有机酸在甲醇中的浓度为20～200ug/ml，例如25～150ug/ml，例如50～100ug/ml；

所述“(2)试样测定”中，计算所述生物样品中的伊马替尼的浓度是采用内标标准曲线法进行计算的。

4.根据权利要求3的方法，其特征在于以下任一项或多项：

所述内标标准曲线法还包括建立标准曲线的步骤；

所述建立标准曲线包括以下步骤：

取100μL不含药的空白生物样品8份，分别置于1.5mL管中，各管分别添加20μL甲醇，分别加入20μL内标溶液(300ng/mL)，以贮备液的形式分别添加伊马替尼或其药用盐以伊马替尼计0.04ng、0.1ng、0.2ng、0.5ng、1ng、2ng、3ng、4ng，将各管涡旋混匀，分别加入100μL甲醇和200mL乙腈，涡旋50秒，于4℃14000rpm离心5min，取上清液200μl转移至1.5mL进样瓶中，作为8份标准样品，待检测；

分别取20μL标准样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中的伊马替尼和内标的色谱峰，并据此得到标准曲线，以用于计算所述生物样品中的伊马替尼的浓度。