[发明专利]利用石墨烯纳米材料获取三维生长肿瘤细胞的方法

说明书

本发明公开了利用石墨烯纳米材料廉价大量获取三维生长肿瘤细胞，此方法至少包括：将含有已经培养好的贴壁肿瘤细胞的培养瓶取出，进行常见的贴壁细胞传代操作，以制成细胞悬液。分别取一定体积的细胞悬液接种于新培养瓶中，而后往瓶中加入含血清的培养液。往新培养瓶中加入适量已经经过真空高压灭菌处理的功能石墨烯材料溶液，在培养箱中培养一段时间后，即可以观察到加入功能石墨烯材料的培养瓶中有大量三维生长的肿瘤细胞。该方法实用性广，原料取自于易于合成的石墨烯材料，且肿瘤细胞培养方法简便，只需比标准传代细胞培养步骤中多一步加入石墨烯纳米材料溶液，即可便捷得到三维生长的肿瘤细胞，为后期的细胞基础研究和药物筛选等提供方便廉价的预处理样品，极大的降低了成本且提高了效率。

技术领域

本发明涉及医用材料制备领域，具体涉及一种利用石墨烯纳米材料来获取三维生长的肿瘤细胞的方法。可进行有关细胞方面的基础研究和药物筛选等应用。

背景技术

传统的细胞培养采用的是二维细胞培养技术，它不能完全模拟细胞在体内的生长和动力学情况。三维细胞培养技术可以观察肿瘤形成的模型和治疗肿瘤药物的作用，还可观察肿瘤的生物学行为比如转移等，也可以观察细胞之间的相互作用等，更能模拟体内的肿瘤组织因各种情况造成的细胞与基质相互作用的微环境。所以三维细胞培养是一种较完美模拟体内细胞情况的培养方式。目前已经有一些相关专利，如专利申请号CN103756904A描述了一种肿瘤细胞培养的三维培养系统，申请公布号CN102952279A描述了用于肿瘤细胞三维培养的水凝胶及应用，授权公告号CN102433258B公开了一种牵张-电联合刺激三维细胞培养装置。

目前已知的各种三维培养技术中，有依靠外界磁场或者电场作用，促使细胞离开培养皿底部而进行三维生长；另外有一些是通过倒置培养技术，使得液滴滴在培养皿上表面，将培养皿翻转培养；还有通过建立三维支架的方法，使得细胞在小通道内进行生长。总体来说，这些方法虽然较好的模拟了细胞三维生长模式，但对于这些方法涉及的实验技能还有支架等部件的设计和制作上，对于普通的实验操作员来说，操作复杂、需要长期培训、反复练习，才能达到实验要求。

本发明的优点在于普通具有生物细胞实验技能的实验员，均能顺利完成实验，而且能观察到清晰的三维细胞生长现象。操作简单，成本低廉，实验方便快捷。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用石墨烯纳米材料获取三维生长的肿瘤细胞的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的，包括以下步骤：

1)将含有已经培养好的贴壁肿瘤细胞的培养瓶取出，进行常见的贴壁细胞传代操作，以制成细胞悬液。

2)分别取一定体积的细胞悬液接种于两个新培养瓶中，而后往瓶中加入含血清的培养液。

3)往步骤2）中的一个新培养瓶中加入适量已经经过真空高压灭菌处理的石墨烯纳米材料溶液。另外一个新培养瓶不加入。

4)将步骤3）的两个新培养瓶在37℃的5% CO₂培养箱中培养一段时间，即可以观察到加入石墨烯纳米材料溶液的培养瓶中有大量三维生长的肿瘤细胞；对于没有加入石墨烯纳米材料溶液的培养瓶，会发现贴壁生长的肿瘤细胞。

进一步的，步骤2）和3）可以交换不影响最后结果。即可以往新培养瓶中加入石墨烯纳米材料溶液再加入细胞悬液，而后进行培养。

进一步的，如步骤1)所述的贴壁肿瘤细胞，在培养瓶中培养一般表现为贴壁生长且接触抑制。

进一步的，如步骤1)所述的常见的贴壁细胞传代培养操作，具有以下步骤：吸掉或倒掉就培养液；往培养瓶中加入胰蛋白酶消化液进行消化；发现细胞单层收缩出现空隙时吸掉消化液；加入含血清的培养液，反复吹打细胞，使其成细胞悬液。

进一步的，如步骤2）所述的一定体积的细胞悬液，一般指将步骤1）中的细胞悬液以1:2或者1:3进行分装。