[发明专利]南方根结线虫MIF基因在降低线虫对植株致病性中的应用

权利要求书

1.南方根结线虫MIF基因在降低线虫对植株致病性中的应用，其特征在于，所述MIF基因为如SEQ ID No.1所示的AMIF基因、如SEQ ID No.2所示的BMIF基因或如SEQ ID No.3所示的CMIF基因。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，通过抑制线虫MIF基因的表达，降低线虫对植物的为害。

3.南方根结线虫MIF基因在培育抗南方根结线虫转基因植株中的应用，其特征在于，所述MIF基因为如SEQ ID No.1所示的AMIF基因、如SEQ ID No.2所示的BMIF基因或如SEQ ID No.3所示的CMIF基因。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，将BMIF基因编码区的1-329bp作为RNAi干扰片段，构建RNAi干扰载体，通过农杆菌介导的方法获得抗南方根结线虫的转基因植物。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，将BMIF基因编码区的1-329bp作为RNAi干扰片段，按正反方向构建于pSAT5干扰载体Intron两侧，再将含有BMIF正反向干扰片段和Intron区的大片段用XbaI/KpnI双酶切从pSAT5载体上切下，连接于psuper植物表达载体，构建psuper-BMIF-Ri植物转基因RNAi干扰载体，通过农杆菌介导法获得抗南方根结线虫的转基因植物。

6.南方根结线虫BMIF基因，其特征在于，所述BMIF基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

7.用于克隆权利要求6所述BMIF基因的引物，其特征在于，所述引物包括：

上游引物BMIF-superF：5’-ATGCCAATTTTACAAGTT-3’；

下游引物BMIF-superR：5’-TTATCCTTTTAATTTCCCATC-3’。

8.克隆权利要求6所述BMIF基因的方法，其特征在于，取接种南方根结线虫45-60天的番茄根系，洗净后挑取卵块在无菌水中连续孵化3天，离心收集每天孵化的新鲜的二龄幼虫；将洗净的根经过酶消解，分离、收集不同虫态的线虫；液氮冷冻，组织研磨器破碎样品，用磁珠法提取mRNA，反转录得到南方根结线虫二龄幼虫cDNA，以该cDNA为模板，利用权利要求7所述引物进行PCR扩增。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增体系为：ddH₂O 28μL，5×Phusion HF buffer 10μL，2.5mM dNTPs 4μL，BMIF-superF 2.5μL，BMIF-superR 2.5μL，cDNA 1.0μL，Phusion DNA polymerase(NEB)0.5μL，DMSO 1.5μL,总体系50μL。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增条件为：98℃预变性30s；98℃变性10s，58℃退火30s，72.0℃延伸1min，共30个循环；72.0℃保温10min后终止反应。