[发明专利]一株能够产生细菌素的分散泛菌及其筛选方法和应用

权利要求书

1.一株能够产生细菌素的分散泛菌，其特征在于，该菌为WH-1，属于泛菌属，其在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M2014508。

2.一种根据权利要求1所述的分散泛菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)、采集土壤样品，在其中加入PBS缓冲液，震荡混匀后过滤，得到滤液溶液；

2)、将所述滤液溶液稀释后与含有耻垢分枝杆菌的水琼脂培养基混合，作为上层培养基；

3)、将所述上层培养基倒入含有7H10固体培养基的培养皿中，于35-39℃培养至产生抑菌圈，分离抑菌菌落，得到所述分散泛菌。

3.根据权利要求2所述的分散泛菌的筛选方法，其特征在于，在步骤1)中：

所述土壤样品取自农村有机肥周边的湿润土壤中，且取样深度为5-10cm。

4.根据权利要求2所述的分散泛菌的筛选方法，其特征在于，在步骤1)中：

按照重量计，每1份土壤样品中加入1.5-2.5份PBS缓冲液，且在所述震荡混匀的过程中，温度为35-37℃、转速为160-200r/m、震荡时间为25-35分钟。

5.根据权利要求2所述的分散泛菌的筛选方法，其特征在于，在步骤2)中：

所述水琼脂培养基的浓度为0.6-0.8％。

6.根据权利要求2所述的分散泛菌的筛选方法，其特征在于，在步骤3)中：

所述7H10固体培养基的配制方法包括：

称取Middle Brook 7H10琼脂19克，向其中加入5毫升甘油、10克葡萄糖后，用双蒸水溶解，并定容至1升。

7.根据权利要求2所述的分散泛菌的筛选方法，其特征在于，在步骤3)之后，还包括：

将分散泛菌接种于7H9培养基中，于28-30℃的条件下培养至少20小时后离心，获得上清液；

将所述上清液的pH调至6.5-7.0后用0.2-0.25微米的滤膜过滤，得到无菌上清液；

将所述无菌上清液依次通过超滤截留、硫酸铵饱和沉淀、透析后，得到粗提液；

将所述粗提液利用RP-HPLC进一步纯化，得到纯品细菌素。

8.根据权利要求7所述的分散泛菌的筛选方法，其特征在于，在所述将分散泛菌接种于7H9培养基中，于28-30℃的条件下培养至少20小时后离心，获得上清液的步骤中：

所述离心过程中的温度为4℃、离心力为10000×g、时间为20min。

9.根据权利要求7所述的分散泛菌的筛选方法，其特征在于，在所述将分散泛菌接种于7H9培养基中，于28-30℃的条件下培养至少20小时后离心，获得上清液的步骤中：

每1升所述7H9培养基中，含有4.7克Middle Brook 7H9粉末、2ml甘油、10g葡萄糖，余量为双蒸水。

10.权利要求2-9任一项所述筛选方法获得的分散泛菌及其产生的细菌素在抗结核病致病菌或作为结核病治疗药物有效成分中的应用。