[发明专利]口服六价重配轮状病毒活疫苗

权利要求书

1.一种口服六价重配轮状病毒活疫苗，其特征在于，所述疫苗含有六种主要流行株血清型G1、G2、G3、G4、G8及G9。

2.根据权利要求1所述的口服六价重配轮状病毒活疫苗，其特征在于，所述的六价重配口服轮状病毒疫苗成分为，

(1)G1、G2、G3、G4、G8及G9血清型活疫苗，各血清型原液滴度为1～5×10⁶FFU/ml；

(2)保护剂：枸橼酸0.5～2g/L、枸橼酸钠50～150g/L、蔗糖250～450g/L、氯化锌5～10mM、氯化钙10～20mM。

3.根据权利要求1或2任一所述的口服六价重配轮状病毒活疫苗，其特征在于，

所述的G1血清型活病毒NIH编号为：MVS-BRV-1；

所述的G2血清型活病毒NIH编号为：MVS-BRV-2；

所述的G3血清型活病毒NIH编号为：MVS-BRV-3；

所述的G4血清型活病毒NIH编号为：MVS-BRV-4；

所述的G8血清型活病毒NIH编号为：1290×UK；

所述的G9血清型活病毒NIH编号为：MVS-BRV-10。

4.权利要求1-3所述的口服六价重配轮状病毒活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备各血清型单价病毒原液，并按照目标滴度配置各个血清型病毒原液，并将各原液依次加入同一提前灭菌的容器中，充分混合并除菌，即得六价混合液；

(2)配制保护剂母液并除菌；

(3)将保护剂母液及步骤(1)配制的六价混合液混合，并将其按照2ml/瓶规格进行分装，即得到成品。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的除菌为0.2μm除菌过滤器过滤除菌。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的制备各血清型单价病毒原液的步骤为：

(1)细胞传代：各血清型病毒的培养基质为Vero细胞，首先复苏Vero细胞工作种子，37℃条件下培养3-5天后，按照一定比例进行传代扩增培养，培养容器依次分别为T25、T75、T175细胞培养瓶、10层细胞工厂、40层细胞工厂，在40层细胞工厂中培养3-5代后即可分别接种G1、G2、G3、G4、G8、G9血清型轮状病毒；

(2)病毒培养：细胞工厂内细胞汇合度达到90％以上后，进行病毒接种操作。病毒接种前，选择一个细胞工厂进行细胞计数，根据计数结果，按照病毒感染复数0.005～0.2进行计算，得出需要的病毒量；用胰蛋白酶对病毒激活，激活条件为37℃、胰蛋白酶浓度10～20μg/ml，激活15～60min；将激活的病毒接种于细胞工厂内，接种后的各血清型病毒培养于35～37℃条件下2～5天；

(3)病毒收获：待细胞病变完全(细胞脱落达到75％以上)将各细胞工厂内的液体收集于一容器内，进行下游处理；

(4)下游操作：首先进行细胞破碎处理，采用冻融或高压均质方式破碎细胞，冻融温度为-30℃～37℃，高压均质压力范围为100～1000bar，高压均质处理完后，进行细胞碎片澄清过滤操作，采用两级过滤，第一级为1.0μm～0.5μm深层过滤器，第二级为0.2μm除菌过滤器，澄清过滤完成后，对病毒液进行超滤浓缩，采用300K孔径超滤膜，对处理后的病毒收获液进行10倍浓缩，即得到单价血清型疫苗原液。

7.权利要求1-4任一所述的口服六价重配轮状病毒活疫苗在制备口服轮状病毒疫苗中的应用。