[发明专利]一种甘胆酸检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种甘胆酸检测试剂盒及其制备方法和用途。

背景技术

甘胆酸(Cholyglycine,CG)是胆酸与甘氨酸结合而成的结合型胆酸，在肝细胞内，胆固醇经过及其复杂的酶促反应，转变成初级胆汁酸。其中有胆酸(CA)和鹅去氧胆酸(CD-CA)。胆酸的类固醇核上有三个羟基(C3、C7、C12)，侧链末端的羟基以肽键与甘氨酸结合。

CG由肝细胞合成，正常代谢途径为肠肝循环，经毛细胆管、胆管排入胆囊，随同胆汁进入十二指肠，帮助食物消化。95％胆酸在回肠末端重吸收，经门静脉再回肝脏，由肝细胞摄取再利用。在血清中主要以蛋白结合形式存在，溢入体循环的总量小于1％。在正常情况下，外周血中胆酸含量甚微,正常成人无论空腹或餐后,其血清CG浓度稳定在低水平。当肝细胞受损时，肝细胞摄取CG能力下降，致使血中CG含量增高；胆汁郁滞时，肝脏排泄胆酸发生障碍，而返流血液循环的CG含量增高，也使血CG含量增高。测定血清甘胆酸(CG)是评价肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标之一。

临床上急性肝炎、慢性活动性肝炎、原发性肝癌、肝硬化、慢迁肝、梗阻性肝病、肠—肝循环障碍、胆石症伴黄疸、胆管、胆囊排泄功能障碍患者血CG均明显高于正常人。

甘胆酸同时也是妊娠晚期血清中最主要的胆汁酸组分。正常妊娠时孕妇血清CG水平随孕周逐步增高，大量雌激素会引起肝细胞膜的改变，减少窦状膜浆的流动性，从而出现胆汁分泌减少，返流入血，出现妊娠期内胆汁淤积现象，CG水平升高。胎盘绒毛静脉腔内外均处于高浓度胆汁酸刺激之中，引起血管收缩，胎盘绒毛表面血管痉挛，氧合血流量减少，导致胎儿缺氧，可出现各种并发症，如胎儿宫内窘迫、早产等。

目前已知的甘胆酸检测方法有放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光法(CL)等。但这些方法均存在较多缺陷，如放射免疫法同位素试剂具有放射性污染及有效期较短和操作不方便等弊端，酶联免疫吸附法操作较为繁琐，耗时较长，不适宜临床上使用。化学发光法尽管灵敏度较高，但需要专用的测定设备，费用较高不利于推广。而胶乳增强免疫比浊法操作简便、可适用于全自动生化分析仪，检测时间不到10分钟适合临床推广。但目前我国市场上的甘胆酸检测试剂盒准确度、灵敏度、重复性仍然较差。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种检测时间短，稳定性好、重复性好、精确度高、检测灵敏度高、线性测试范围宽、抗干扰性强的甘胆酸检测试剂盒，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明的第一方面提供一种甘胆酸检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1、试剂R2和校准品，所述试剂R1的组分包括：生物缓冲液1、保护剂1、反应增强剂1、表面活性剂1、防腐剂1、稳定剂1；试剂R2的组分包括：生物缓冲液2、抗甘胆酸抗体的胶乳颗粒、保护剂2、反应增强剂2、表面活性剂2、防腐剂2、稳定剂2；校准品的组分包括：生物缓冲液3、保护剂3、防腐剂3、甘胆酸标准品、稳定剂3。

优选的，所述试剂R1中，所述生物缓冲液1选自氨基丁三醇缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris-HCL缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液中的一种或多种的组合；所述试剂R2中，所述生物缓冲液2选自氨基丁三醇缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris-HCL缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液中的一种或多种的组合；校准品中，所述生物缓冲液3选自氨基丁三醇缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris-HCL缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液中的一种或多种的组合。

更优选的，所述试剂R1中，生物缓冲液1的浓度为20～200mmol/L，PH6.5-7.5；所述试剂R2中，生物缓冲液2的浓度为20～200mmol/L，PH6.5-7.5；校准品中，生物缓冲液3的浓度为20～200mmol/L，PH6.5-7.5。

本发明中，各生物缓冲液的主要作用是保证试剂中各组分PH值保持在一定范围内，保证各组分性能稳定，最终保证整个试剂盒的性能稳定，测试结果稳定可靠。

优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明对所述试剂R1中的生物缓冲液1进行了改进，所述试剂R1中的生物缓冲液1包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3.5－7.5g/L，生物缓冲液1的pH值为7.2－7.6。

优选的，各组分在生物缓冲液1中的浓度为：