[发明专利]一种血栓成分的染色方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学技术领域，特别是一种涉及血栓成分的化学染色方法和血栓成分的识别及血栓性质的鉴定方法。

背景技术

在医学标本诊断及动物实验过程中，经常需要对血栓进行鉴定，此血栓鉴定可通过病理检测完成，即通过血栓的染色和识别而鉴定血栓的成分，包括血栓中的红细胞、白细胞、血小板及纤维素或称纤维蛋白组织；鉴定血栓的性质，包括红血栓、白血栓、混合血栓。

现有技术中涉及血栓的染色及识别技术主要有：(1)苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining)，简称HE染色法：它是病理技术中最基本最常用的染色方法，广泛应用于各种组织细胞的染色，也用于血栓的染色。HE染色的染液中的苏木精为碱性染料，使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体染成紫蓝色；而染液中的伊红为酸性，使细胞质和细胞外基质中的成分染成红色，故HE染色的优点是仅用苏木精和伊红两种染料、染色步骤较少、染色过程较快，只需1-2小时，能使无色切片的组织和细胞清晰显示；缺点是，对于血栓来说，除白细胞胞核被染成蓝色，其它成分均被染成红色，包括血栓中的红血球、白细胞胞浆、血小板、纤维素成分，这些成分无法确切区分；(2)磷钨酸苏木素染色法(PTAH法)：它是用高锰酸钾和草酸分别对切片进行氧化漂白处理后，用磷钨酸苏木素染料浸染标本24小时，使血栓成分中纤维素网状结构团块物质染成蓝紫色，有利于辨别血栓甚至微小血栓，故PTAH法的优点是可通过识别纤维素以鉴定血栓特别是微小血栓，缺点是染色时间长，不能鉴定血栓中的其它细胞成分包括红细胞、白细胞、血小板；(3)Martius Scarlet Blue(MSB)染色法：纤维素MSB染色法分别经过天青石蓝液染、苏木素染液染、马休黄液染、亮结晶紫猩红染液染、磷钨酸、苯胺兰液染处理，将血栓中红细胞染成黄色、白细胞核染成蓝黑色、纤维素染成金黄至鲜红色，此种染色法存在染色步骤繁多、不易操作、染色结果色彩斑斓、对比性差的缺点；(4)血细胞染色：例如过氧化物酶染色使蓝色定位于细胞浆、过碘酸-雪夫染色紫使红色定位于细胞浆中的糖原类物质，但不能识别血栓中的纤维素。因此，现有血栓染色技术有待进一步改进和发展。

发明内容

本发明目的是：提供了一种简易操作、效果明显和效率高的血栓染色方法，通过染色使血栓不同成分呈现不同颜色，通过区别颜色、结合形态学改变，识别血栓成分、鉴定血栓性质、协助血栓的临床诊断及动物实验结果判断。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种血栓成分的染色方法，对石蜡组织切片依次经过脱蜡、水化后，利用铁明矾水溶液媒染、苏木精染色、苦味酸-橙黄G溶液染色、胭脂红-品红溶液染色、磷钨酸分化颜色，使血栓中不同成分呈现不同颜色。

本发明的目的还可通过以下技术方案实现：

进一步的，所述的组织切片在脱蜡和水化前先置于50-70℃温箱中加温25-60分钟。

进一步的，所述的脱蜡、水化过程包括依次将切片浸泡于100％酒精2-4分钟两次、95％酒精2-4分钟两次、70％酒精2-4分钟两次、TBS(Tris碱缓冲盐溶液，或称三羟甲基氨基甲烷缓冲盐溶液)溶液2-4分钟一次。

进一步的，所述组织切片染色及分化颜色中，铁明矾水溶液浓度为4-6％、作用时间为4-6分钟；苏木精溶液染色时间为4-6分钟；苦味酸-橙黄G溶液染色时间为30-60分钟；胭脂红-品红溶液染色及磷钨酸分化染色，时间均分别为4-6分钟，各染色步骤间均用水清洗组织切片。

进一步的，所述苦味酸-橙黄G溶液的配制方法是：量取8-12ml饱和苦味酸水溶液，加35-45ml饱和苦味酸异丙醇溶液，再称取0.5-1.5g橘黄G，将三者混和、搅拌均匀。

进一步的，所述胭脂红-品红溶液的配置方法是：称取0.15-0.35g胭脂红、0.25g酸性品红，量取0.3-0.6ml冰醋酸、40-60ml蒸馏水，四者混和、搅拌均匀。

进一步的，所述TBS溶液的配制方法是：在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后于高压下蒸汽灭菌20分钟，室温保存。或购买商业成品的TBS溶液。

一种上述血栓成分的染色方法的应用，通过对血栓成分染色方法后的组织切片进行血栓成分的识别，识别方法为：血栓中圆形深红染色者为红细胞、圆形红色细胞浆含蓝色细胞核者为白细胞、不规则点状深蓝色者为血小板、网状或丝状紫红色者为纤维蛋白组织。