[发明专利]促进微拟球藻大量积累高不饱和脂肪酸的方法

说明书

本发明公开了一种促进微拟球藻大量积累高不饱和脂肪酸的方法，属水产养殖领域。传统上微拟球藻采用开放型跑道式大池培养，生长慢，操作麻烦，易污染，高不饱和脂肪酸含量低。本发明采用二阶段养殖法，第一阶段在光照培养箱中进行，提供较低的温度和光照强度，有利于藻细胞生长且避免强光对细胞造成光伤害，第二阶段在微藻培养室中采用塑料薄膜袋充气培养，提高了温度和光照，有利于高不饱和脂肪酸积累。本发明还对传统培养液配方进行了优化，补充了人尿，KBr，H₃BO₃，烟酸，盐酸吡哆醇，土壤浸出液等，营养更全面、均衡，不易污染，成本低，易于操作，高不饱和脂肪酸含量提高140％。

技术领域

本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种促进微拟球藻大量积累高不饱和脂肪酸的方法。

背景技术

微拟球藻Nannochloropsis oculata，又名微绿球藻、眼点拟微球藻，是直径2-3μm的真核单细胞绿色微藻，隶属绿藻门，绿藻纲，四胞藻目，胶球藻科，微绿球藻属。细胞内油脂含量占干重68％以上，油脂以C16和C18脂肪酸为主，是公认的最有希望用于工业化提炼生物柴油的海洋微藻。另外，该藻还富含高不饱和脂肪酸EPA即二十碳五烯酸，EPA对人体有重要的生理和保健功能，可辅助防治心脏病、动脉硬化、癌症、气喘、风湿性关节炎、糖尿病。微拟球藻在有机质多，特别是氮、磷盐丰富的水体中生长旺盛。最适生长温度25-30℃，在盐度4-36‰范围内均能正常生长，最适光照强度4000-20000lux，适宜pH范围7.5-8.5。

以前，宋理平发明了一种高EPA产率的微拟球藻培养系统及培养方法(申请号CN201310646558)。该发明在传统环形跑道式培养池外增加太阳能光照循环装置，增强局部水循环，增大受光面积；同时增设通气总管及支管，利用通气气流驱动培养液不断流动，既提供了碳源，又使得培养液不断循环，所有藻细胞都能得到充足光照和二氧化碳。本发明还为微拟球藻三个自然生长阶段提供了不同的培养液配方，使得微拟球藻在密度最大时，EPA含量最高。该发明生产成本低，EPA产率高，但基建投资大，操作麻烦，易污染。另外，赵心清公开了一株富含十六碳二烯酸的海洋微拟球藻及提高其生物量和油脂含量的培养方法(申请号CN201310065178)，通过1/5新鲜培养基置换，该藻株在含有37.5mg/L的f/2培养基中油脂含量能达到64.3％，在含1.5g/L的BG11培养基中生物量能达到1.4g/L，油脂产率达到30mg/L/d。在良好培养条件下其油脂中长链饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸含量超过65％，适合用于生物柴油炼制。但该藻株抗逆性差，不耐低温，难以大规模推广应用。

为了克服目前技术的不足，本发明采用二阶段养殖法，第一阶段在光照培养箱中进行，提供较低的温度和光照强度，有利于藻细胞生长且避免强光对细胞造成光伤害，第二阶段在微藻培养室中采用塑料薄膜袋充气培养，提高了温度和光照，有利于高不饱和脂肪酸积累。本发明还对传统培养液配方进行了优化，补充了人尿，KBr，H₃BO₃，烟酸，盐酸吡哆醇，土壤浸出液等，营养更全面、均衡，不易污染，成本低，易于操作，高不饱和脂肪酸含量提高140％。

发明内容

为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种促进微拟球藻大量积累高不饱和脂肪酸的方法，具体方法如下：

步骤1培养液的配制培养液成分：NaCl 25份，NaNO₃ 1.5份，过磷酸钙0.3份，NH₄Cl1.2份，FeC₆H₅O₇ 0.01份，MgSO₄·7H₂O 5份，人尿1.5份，KBr 0.02份，H₃BO₃ 0.01份，生物素0.001份，烟酸0.01份，盐酸吡哆醇0.02份，羊粪浸出液2份，土壤浸出液1.2份，煮沸冷却后的海水1000份；取此培养液2000毫升装入一3000毫升的三角烧瓶，保鲜膜和橡皮筋封口，放在摇床上摇匀15分钟，放入4℃冰箱保存备用。