[发明专利]一种采用超滤法辅助双水相萃取技术提取乳过氧化物酶的方法

权利要求书

1.一种采用超滤法辅助双水相萃取技术提取乳过氧化物酶的方法，其特征包含以下步骤：

(1)双水相萃取乳过氧化物酶：

除去新鲜的牛乳中的脂肪和酪蛋白后得到乳清，在室温条件下，直接向乳清中连续添加聚乙二醇(PEG)和盐并将其置于搅拌器上不断搅拌，直至聚乙二醇和盐完全溶解于乳清中，其中聚乙二醇的分子量为6000Da，盐为MgSO₄，以w/w计，聚乙二醇的终浓度为12-16％，MgSO₄的终浓度为10％-14％，使用NaOH调节体系pH至8.0-9.0，静止，待两相完全分离，收集体系的下相，即盐相部分；

(2)超滤：

将收集的盐相溶液，使用HCl调节pH至6.5-7.5，用超滤膜进行超滤分离，以除去杂蛋白，收集截留溶液，进而达到浓缩纯化乳过氧化物酶的目的；

(3)脱盐处理：

将步骤(2)收集的截留溶液装入透析袋内进行脱盐；

(4)干燥：

将脱盐溶液冷冻干燥即制得乳过氧化物酶粗制品。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中PEG 6000的终浓度为16％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中MgSO₄的终浓度为10％。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中使用NaOH调节体系pH至8.5。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中使用分子量30-50kDa的超滤膜进行超滤分离，以除去部分分子量小于超滤膜分子量的杂蛋白，收集截留溶液，进而达到浓缩纯化乳过氧化物酶的目的。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于步骤(2)中超滤所使用的超滤膜的分子量为30kDa。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中将步骤(2)收集的截留溶液装入分子量为2-14kDa的透析袋内进行脱盐，每隔1-2h更换一次去离子水，透析6-8h即可。

8.如权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于步骤(2)中浓缩纯化乳过氧化物酶产品，其回收率为130-150％。

9.如权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于步骤(2)中浓缩纯化乳过氧化物酶产品，其纯化倍数为3.20-3.70。