[发明专利]希尔斯山羊草1Ss染色体特异分子标记及其应用

权利要求书

1.一种希尔斯山羊草1S^s染色体特异分子标记，其特征在于

短臂引物对碱基序列如下：

MAG2137-EST-SSR：

F：5’-GAGTTCGATGACATGGCTGA-3’，

R:：5’-CCGATAACAAAGTGCGTGAA-3’；

长臂引物对为下述引物对中的一对以上：

Xgwm135-SSR：

F：5’-TGTCAACATCGTTTTGAAAAGG-3’，

R：5’-ACACTGTCAACCTGGCAATG-3’；

BG606586-EST-STS：

F：5’-GGAGAAGCAAGACCACTTCG-3’，

R：5’-ATGTCGAATTCCAGCACCTC-3’；

BF604958-EST-STS：

F：5’-GCAAAAGAAGAAGGGGAAGG-3’，

R：5’-GGTCATGTTGGTGATGTTGG-3’；

BF474878-EST-STS：

F：5’-CATGTATCTGGTGGTGAGCTTT-3’，

R：5’-GTTCACCTGTGCTTGCATTC-3’；

希尔斯山羊草1S^s染色体特异分子标记为上述5对引物中的一对以上的组合或者短臂引物对与一对以上的长臂引物对的组合。

2.一种权利要求1所述的希尔斯山羊草1S^s染色体特异分子标记的应用，其特征在于使用权利要求1所述的希尔斯山羊草1S^s染色体特异分子标记进行PCR扩增，对小麦背景中是否含有希尔斯山羊草1S^s染色体进行检测或辅助检测。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于检测或辅助检测步骤如下：

（1）以待测的可能含有希尔斯山羊草1S^s染色体或染色体片段的小麦背景系的基因组总DNA为模板，用权利要求1所述的希尔斯山羊草1S^s染色体特异分子标记分别对模板和对照进行PCR扩增，扩增结果使用凝胶电泳进行检测；

（2）如果待测模板DNA凝胶电泳检测图谱中含有与阳性对照相同的特异DNA条带而阴性对照无该带，则说明待测小麦背景系的基因组中含有希尔斯山羊草1S^s染色体；如果待测模板DNA凝胶电泳检测图谱中不含有与对照相同的特异多态性DNA条带，则说明待测小麦背景系的基因组中不含有希尔斯山羊草1S^s染色体。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于步骤（1）中使用希尔斯山羊草、中国春-希尔斯山羊草1S^s附加系为阳性对照，以中国春小麦和/或其他不同小麦品种/品系为阴性对照。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于BG606586-EST-STS、BF604958-EST-STS和BF474878-EST-STS引物对扩增特征在于15 μL PCR反应体系为：25 ng/μL的模板DNA 1μL， 5 U/μL Taq DNA polymerase  0.15μL，200 μM的dNTPs，含Mg²⁺的10× PCR buffer 1.5 μL，10μM的上、下游引物各 1 μL，用无菌双蒸馏水补充反应体系至15μL；

PCR反应扩增程序为：94 ℃预变性3 min，随后35个循环：94℃变性45 S，57℃退火45 S，72℃延伸2 min，最后72℃延伸10 min，4℃保存。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于MAG2137-EST-SSR引物对扩增特征在于15 μL PCR反应体系为：25 ng/μL的模板DNA 1μL， 5 U/μL Taq DNA polymerase  0.15μL，200 μM的dNTPs，含Mg²⁺的10× PCR buffer 1.5μL，10μM的上、下游引物各 1μL，用无菌双蒸馏水补充反应体系至15μL；

PCR反应扩增程序为：94 ℃预变性3 min，随后35个循环：94℃变性45 S，52℃退火45 S，72℃延伸2 min，最后72℃延伸10 min，4℃保存。