[发明专利]一种猪圆环病毒cap蛋白嵌合猪瘟病毒B细胞表位的重组病毒及应用

说明书

技术领域

本发明属于兽医生物技术领域，具体涉及一种猪圆环病毒cap蛋白嵌合猪瘟病毒B细胞表位的重组病毒及应用。

背景技术

猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)的成员，包括P CV1和PCV2，是目前发现的世界上最小的脊椎动物病毒。PCV1无致病性，而PCV2有致病性。PCV2在临床上可感染5-12周龄的猪发生断奶猪多系统衰竭综合征(postweaning mul tisystemic wastingsyndrome，PMWS)，还可引起猪皮炎肾病综合征(porcine dermatitis and nephropathy，PDNS)，猪呼吸道疾病复合症(porcine respiratory diease complex，PRDC)，增生性坏死性肺炎(proliferative and necrotizing pneumonia，PNP)等疾病。目前，国际上为了研究的方便，把这些疾病统称为猪圆环病毒病(postweaning multisystemic wasting syn drome associated diease,PCVAD)。PCV的ORF2基因全长702bp(nt 1,735-1,034)，其编码的Cap蛋白由234个氨基酸组成，大小为27.8kDa。Cap是主要的免疫原性蛋白并能诱导特意的PCV2中和抗体(Pogranichnyy et al.,2000)，因此ORF2基因是设计PCV2新型疫苗的首选目标基因。Liu等(2001)通过大肠杆菌表达ORF2基因，证明其具有很强的免疫原性；在杆状病毒表达ORF2基因后可以形成圆环病毒样颗粒(Virus like particles，VLP)(Nawagitgul,2000)。Cap蛋白的N段是高度保守且富含精氨酸的序列，N段前41个氨基酸片段是Cap蛋白核定位信号序列(NLS)，研究表明缺失N段核定位序列不影响其组装成病毒样颗粒的特性。

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由黄病毒科瘟病毒属猪瘟病毒(Classical swine f ever virus,CSFV)引起的一种高度接触性、出血性和致死性传染病。世界动物卫生组织(O IE)将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。当前猪瘟在我国很多猪场流行，临床上表现为早产、流产、死胎、木乃伊胎及猪生产能力下降等。同时该病与伪狂犬病、圆环病毒感染相关疾病等多重感染和混合感染常常发生。E2蛋白是诱导机体产生中和抗体的主要保护性抗原主要成分，可以抵抗强毒的攻毒保护实验(Dong et al.,2006；Che n et al.,2011；Llilianne Gangesa et al.,2012)。E2蛋白存在4个相对独立的抗原区：A，B，C和D，而B区693-716之间的氨基酸序列(CKEDYRYAISSTNEIGLLGAGGLT)属于B细胞表位，能产生中和抗体并提供完全的保护率(Dong XN,et al.,2006，2007)。

近年来，杆状病毒表达载体因其具有操作简单、安全性高，可容纳大的目的基因，表达外源蛋白效率高，有翻译后修饰的作用，表达蛋白的免疫原性、生物活性与天然的蛋白相似等优点，已经在表达载体上占了主导的地位(Anderson et al.,1995；Wang et al.,2001；Ri beiro et al.,2001)。而近年来发展起来的病毒样颗粒疫苗，含有病毒的一个或多个抗原蛋白、具有与病毒粒子相似结构的颗粒，不含有病毒的遗传物质，不能自主复制、没有感染性，能以天然构象和模式递呈抗原，有效刺激体液和细胞免疫，诱导机体产生良好的免疫保护。本发明在PCV2的ORF2基因基础上，缺失其N段核定位39个氨基酸序列，插入CSFV B细胞表位或偶联T细胞氨基酸的基因序列，以杆状病毒表达系统表达嵌合B细胞表位的PCV2的Cap蛋白，研究B细胞表位的PCV2的病毒样颗粒疫苗形成的能力。同时利用形成的嵌合病毒样颗粒制备亚单位二价疫苗，通过动物试验评价对猪瘟病毒和猪圆环病毒的免疫原性效果，为临床上防控猪瘟和猪圆环病毒病提供理想的候选疫苗株。

发明内容

本发明的一个目的是提供了一种人工修饰合成的猪圆环病毒cap蛋白基因和猪瘟病毒B细胞表位基因序列嵌合的cDNA基因序列cap-24B，其序列分别为SEQ ID NO.1所示，编码的蛋白质为SEQ ID NO.2所示。