[发明专利]一种壳聚糖酶及应用该聚糖酶生产壳寡糖的方法

权利要求书

1.一种壳聚糖酶，其特征在于，该聚糖酶分离自土壤芽孢杆菌属AMI09菌株。

2.一种应用聚糖酶生产壳寡糖的方法，其特征在于，所述聚糖酶为权利要求1所述的聚糖酶。

3.如权利要求2所述的应用聚糖酶生产壳寡糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：从土壤试料中分离芽孢杆菌属AMI09菌株；

S2：培养芽孢杆菌属的AMI09菌株；

S3：从培养液中分离壳聚糖酶；

S4：制备壳寡糖的干燥粉末。

4.如权利要求3所述的应用聚糖酶生产壳寡糖的方法，其特征在于，所述步骤S1中包括如下步骤：

a1:用灭菌蒸馏水稀释取自韩国庆南南海岸一带的土壤试料；

a2:将步骤a1中的土壤稀释液涂抹在MS琼脂培养基上进行培养；

a3:将步骤a2中培养基上的菌落进行纯化；

a4:测定各菌落的壳聚糖酶活性、分离得到符合条件的壳聚糖酶的AMI09菌株。

5.如权利要求4所述的应用聚糖酶生产壳寡糖的方法，其特征在于，所述a2步骤中MS琼脂培养基为含有0.5％壳聚糖、0.5％酵母提取物、0.2％K₂HPO₄、0.1％K₂HPO₄、0.07％MgSO₄7H₂O、0.05％NaCl、0.05％KCl、0.01％CaC l₂的培养基。

6.如权利要求2所述的应用聚糖酶生产壳寡糖的方法，其特征在于，所述步骤S2中包括如下步骤：

b1:利用LB琼脂培养基培养所述S1步骤得到的芽孢杆菌属AMI09菌株；

b2:将芽孢杆菌属AMI09菌株接种到LB培养液中振荡培养，得到种子培养液；

b3:种子培养液接种到MS培养基上进行主培养，形成主培养液。

7.如权利要求6所述的应用聚糖酶生产壳寡糖的方法，其特征在于，所述LB琼脂培养基含有1.0％细菌培养基用胰化蛋白胨、0.5％细菌培养基用酵母提取物和1.0％NaCl，PH值为7.0。

8.如权利要求2所述的应用聚糖酶生产壳寡糖的方法，其特征在于，所述步骤S3中包括如下步骤：

c1：取所述主培养液的上清液进行浓缩、洗涤得到初步溶液；

c2：离子交换层处理c1步骤中的初步溶液，得到壳聚糖酶；

c3：凝胶过滤层析处理；

c4：离子水透析、冷冻干燥。

9.如权利要求8所述的应用聚糖酶生产壳寡糖的方法，其特征在于，采用分子量为cut-off：10000道尔顿的超滤器对主培养液进行浓缩，采用PH值为5.0的乙酸钠缓冲溶液进行洗涤。

10.如权利要求2所述的应用聚糖酶生产壳寡糖的方法，其特征在于，所述步骤S3中包括如下步骤：

d1：将步骤S3中的壳聚糖酶粉末溶解于含有壳聚糖的基质水溶液，形成酶反应液；

d2：第一次过滤酶反应液，浓缩酶反应液；

d3：第二次过滤酶反应液，对酶反应液进行喷雾干燥。