[发明专利]一种快速检测蜂蜜中脯氨酸含量的试剂盒

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种快速检测蜂蜜中脯氨酸含量的试剂盒及其使用方法,属于食品质量安全检测技术领域。

背景技术

蜂蜜中虽然含有很多种氨基酸，然而只有脯氨酸才能作为衡量蜂蜜质量的指标之一。蜂蜜中脯氨酸的含量比总酚及总黄酮的还要高，并且脯氨酸的含量与酚类化合物浓度成正比。因此，脯氨酸不仅具有抗氧化性，可以用来衡量蜂蜜的抗氧化性，而且也可以为检测蜂蜜质量指标提供科学依据。目前国内外检测蜂蜜中脯氨酸含量的方法主要有分光光度法和色谱法。以上方法虽然较准确，但耗时，并且对设备和检测人员的技术要求较高，无法在基层部门得到广泛应用。因此，本发明在前人对蜂蜜中脯氨酸含量检测技术研究的基础上，通过优化显色体系中各组成成分的浓度和体积，制备了试剂盒及包含多种颜色的脯氨酸标准比色卡，旨在建立一种对蜂蜜中的脯氨酸含量进行简单、快速测定的方法。

发明内容

本发明的目的是在于提供一种快速检测蜂蜜中脯氨酸含量的试剂盒及其使用方法，能够现场完成对蜂蜜中脯氨酸的快速测定，具有所用显色体系稳定、操作简便、快速的特点。

为实现上述目的，本发明的技术方案为： 

一种快速检测蜂蜜中脯氨酸含量的试剂盒，由试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成；所述试剂Ⅰ由茚三酮、甲酸和乙二醇甲醚组成，所述试剂Ⅱ由丙酮组成。

所述试剂Ⅰ中茚三酮的浓度为2wt.%，甲酸和乙二醇甲醚的体积比为1:1。

快速检测蜂蜜中脯氨酸含量的试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

（1）样品的制备：称取2.5g蜂蜜样品于小烧杯中，加入10mL蒸馏水搅匀后，用玻璃棒将其转入50mL的容量瓶，加蒸馏水定容至刻度，摇匀；

（2）显色：取1.00mL待测样品于具塞刻度试管中，然后向试管中加入1.0mL试剂Ⅰ，塞紧瓶盖，放在沸水中加热15min后马上取出，加入5mL试剂Ⅱ显色5min。

（3）检测: 通过显色后溶液的颜色与比色卡的颜色对比，确定出脯氨酸的含量值。

上述步骤（2）中所述的比色管为25mL具塞比色管，管径2cm, 管高15 cm; 上述步骤（3）中所述的比色卡，在常温下，将一系列脯氨酸标准工作溶液按上述中所述的步骤显色，根据所获颜色，制成比色卡，比色卡对应的脯氨酸含量范围为0-50 (mg/100g)。

本发明的有益效果：本发明研制的蜂蜜中脯氨酸含量快速检测的试剂盒和方法，其显著特点是：1. 显色体系稳定，通过筛选，把国家标准方法中所使用的异丙醇换成丙酮后，有效克服了之前显色体系不稳定的缺点，从而大大提高了检测的准确性；2. 本发明借助比色卡对照检测，不需要分光光度计等仪器设备，操作简便，便于现场检测；3. 本方法快速、操作简便。该方法适合于现场快速检测蜂蜜中的脯氨酸含量，是快速判断蜂蜜产品质量水平的重要依据之一。

具体实施方式：

实施例1：

比色卡的制作方法

（1）标准溶液的制备：准确吸取25μg/mL脯氨酸标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL(相当于蜂蜜中脯氨酸的含量分别为0、10、20、30、40、50 mg/100g)到六支具塞刻度试管中，加蒸馏水补足体积到lmL;

（2）显色：向试管中加入1.0mL试剂Ⅰ，塞紧瓶盖，放在沸水中加热15min后马上取出，加入5mL试剂Ⅱ显色5min。根据所获颜色，制成比色卡，比色卡对应的脯氨酸的含量范围为0-50 (mg/100g)。

实际样品测定

（1）样品的制备：称取2.5g龙眼蜜于小烧杯中，加入10mL蒸馏水搅匀后，用玻璃棒将其转入50mL的容量瓶，加蒸馏水定容至刻度，摇匀；

（2）显色：取1.00mL待测样品于具塞刻度试管中，然后向试管中加入1.0mL试剂Ⅰ，塞紧瓶盖，放在沸水中加热15min后马上取出，加入5mL试剂Ⅱ显色5min;

（3）检测: 通过显色后溶液的颜色与比色卡的颜色对比，其颜色介于脯氨酸含量为10 (mg/100g)和20 (mg/100g)的色泽之间，故确定蜂蜜样品中的脯氨酸含量为15 (mg/100g)。

实施例2：

比色卡的制作方法（同实例1）

实际样品测定

（1）样品的制备：称取2.5g野桂花蜜于小烧杯中，加入10mL蒸馏水搅匀后，用玻璃棒将其转入50mL的容量瓶，加蒸馏水定容至刻度，摇匀；