[发明专利]一种牛支原体检测试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种检测牛支原体抗体的试纸条，该试纸条由底板、设置于底板上依次线性排列的样品吸收垫、包被有抗原的胶体金垫、硝酸纤维膜和吸水垫组成，在硝酸纤维素膜上包被有质控线与检测线，其特征在于：胶体金垫包被的抗原为牛支原体P48融合蛋白，检测线包被的是山羊抗牛二抗IgG，质控线为兔源P48融合蛋白的多抗IgG。

2. 权利要求1所述的检测牛支原体抗体的试纸条的制备方法，其特征在于：用经纯化后透析的P48重组蛋白包被胶体金制备胶体金垫；在硝酸纤维素膜上包被质控线与检测线，其中：检测线的所用抗原为亲和纯化山羊抗牛二抗IgG，质控线抗原为P48蛋白多抗IgG，在底板上依次分别将样品吸收垫、胶体金垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫按顺序装配。

3.根据权利要求2所述的检测牛支原体抗体的试纸条的制备方法，其特征在于：胶体金包被P48蛋白的浓度为6ug/ml,抗原包被金颗粒的时间为30min，在抗原结合后加入20%BSA溶液（20gBSA加入到100ml去离子水中即为20%BSA） 50ul/ml进行封闭，封闭时间为30分钟，离心后利用重悬液将胶体金颗粒重悬制备胶体金垫，然后干燥处理，重悬液配方为：0.02M四硼酸钠、0.5% BSA、3%蔗糖、0.5%酪蛋白，0.5%吐温20该重悬液有助于金标垫更好的解离，重悬液中的BSA能够封闭非特异性位点避免假阳性的出现，酪蛋白与蔗糖成分能够保护金颗粒包被的抗原。

4.包被硝酸纤维素膜检测线的所用亲和纯化山羊抗牛二抗IgG抗原浓度为100ug/ml，包被量为1ul/cm，包被硝酸纤维素膜质控线P48蛋白多抗IgG抗原浓度为200ug/ml，包被量为1ul/cm。

5.权利要求2或3所述制备方法中使用的P48蛋白多抗IgG抗原的制备方法，其特征在于用弗氏完全佐剂3mL加1mg/mlP48蛋白抗原3mL制备出弗氏完全佐剂抗原，并充分混合乳化；用弗氏不完全佐剂3mL加1mg/mlP48蛋白3mL制备出弗氏不完全佐剂抗原，并充分混合乳化；选用健康雄性大白兔在兔两后腿足部皮下，腘淋巴结处及背部皮下多点接种弗氏完全佐剂抗原，接种总量为1.5mL；14日后仍以弗氏完全佐剂抗原1.5ml由背部皮下多点接种，进行第二次免疫；隔14日后，以弗氏不完全佐剂抗原，在每只兔脚掌两点，背部皮下多点接种，接种总量为3mL，为其第三次免疫；隔14日后由耳缘静脉采血分离血清，以IHA试验试血，免疫兔血清IHA效价达1:512，正式采血，3000rpm离心5min分离血清，得到P48蛋白高免血清，用饱和硫酸铵沉淀法将分离到的血清纯化获得P48蛋白多抗IgG。