[发明专利]一种东方百合的繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及到一种东方百合外植体消毒方法，组织培养及植株再生过程即一种东方百合的繁殖方法。

背景技术

百合是市场上最畅销的花卉之一，东方百合因花色丰富，香气宜人，姿态优雅，寓意丰富，花朵保质期长而深受人们的喜爱。百合通常采用营养繁殖的方法，比如使用鳞茎及鳞片、株芽、茎等来繁殖，然而这些方法都会导致品种的严重退化，抗病性变差。解决这一问题最佳方法是采用植物组织培养技术，获得性状稳定的脱毒苗。

建立无菌培养体系是植物组织培养的第一步，通常采用的方法是使用乙醇、H₂O₂、NaClO、CaClO、HgCl₂等表面消毒剂来处理外植体，然后再接种到培养基中进行培养。但是外植体长期与外界接触，不可避免地带有微生物，尤其是对于百合而言，其生长周期较长，消毒起来比较费力。而且百合主要通过鳞茎来繁殖，鳞茎在土壤中生长，带有的病毒和病菌更多。在实验中，课题组发现百合鳞茎使用0.1％HgCl₂消毒15min后，污染率达80％左右。另外，上面提及的化学消毒试剂在使用时应特别注意，重金属汞会对操作人员和环境造成伤害，NaClO和CaClO能够产生氯气等毒性高的物质。

外植体的选择对于植物再生体系的建立也十分关键。由外植体到植株再生一般通过体细胞胚途径、愈伤组织和不定芽途径，只有选择合适的外植体才能够形成体细胞胚、愈伤组织或不定芽。百合植株再生过程中常常使用鳞茎、叶片作为外植体。比如付文奇等(NAA和2,4-D对东方百合组织培养的影响.西北林学院学报,2008.23(2):p.83-86)使用鳞片为外植体，建立了东方百合“蒂伯”小鳞茎培养体系。张文种等人(不同激素配比对麝香百合鳞茎芽诱导的影响.亚热带植物科学,2002.31(1):p.21-24)也使用鳞茎成功诱导出麝香百合小鳞茎。还有赵庆芳等(东方百合组织培养和快速繁殖研究.西北师范大学学报(自然科学版),2003.39(1):p.66-6)建立东方百合快速无性繁殖系也是通过鳞茎诱导出不定芽实现的。还有一些文献报道，通过叶片成功建立百合再生体系。如袁芳亭等(麝香百合的叶片离体培养及植株再生.湖北农业科学,2001(3):p.50-51)取麝香百合带芽的幼嫩叶片，在NAA 1.0mg L^-1+6-BA 0.1mg L^-1诱导下生长出愈伤组织，再由愈伤组织诱导不定芽。孟芮等(百合遗传转化受体系统的建立.西北农林科技大学学报(自然科学版),2006.34(4):p.32-38)在建立东方百合“索邦”再生体系时使用叶片作为外植体。这些研究虽然都成功建立了百合再生体系，但是由于鳞片、叶片等并不能实现脱除病毒，还有上面提及的消毒过程繁琐，一定程度上增加了技术难度。因此有研究人员提出使用生长速度快的组织作为外植体，如茎尖和花部组织。

花部组织作为外植体的诱导在于其在环境中暴露的时间短，消毒相对简单。许洁婷等(麝香百合花部组织离体培养与植株再生.上海交通大学学报(农业科学版),2008.26(1):p.13-16)比较了麝香百合花部组织诱导愈伤的效果，结果说明，诱导愈伤组织的能力由强到弱依次为花丝>花托>花梗>花柱>花瓣。但是一般认为外植体的分化程度越高其脱分化的能力就越弱，所以，如何使花部组织脱分化，对于东方百合的快速繁殖而言显得十分重要。植物激素，尤其是生长素和细胞分裂素的比例对于体细胞胚的形成、愈伤和不定芽的诱导具有决定性作用，它们的使用浓度精确到mg/L，使用时必须精确添加，否则结果将差距巨大。所以找到合适的激素及其使用浓度，是植物实现快速繁殖的关键。

植物快速繁殖的最后一步是生根和移栽。不定芽生根后或体细胞胚发育成熟后，就可以进行生根和移栽了。组培苗长期生长在高湿度、稳定恒定、光照柔和的环境中，需要一个适应的过程，需要对组培苗进行驯化，培养基质配比条件进行探索。

发明内容

本发明针对现有技术的上述不足，提供一种不会对人体和环境造成伤害的灭菌方法，选用的外植体易于脱除病毒、取材方便，且经过试验优化的植物激素种类及其使用浓度能对愈伤组织诱导，不定芽的形成以及生根等具有决定性作用的东方百合的繁殖方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种东方百合的繁殖方法，该方法包括以下环节：以东方百合的花丝为外植体，经消毒，愈伤组织诱导，不定芽的诱导，不定芽的增殖，不定芽的诱导生根，组培苗的炼苗和移栽直至形成苗。