[发明专利]一种抗J亚群禽白血病病毒感染的表位疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学领域，具体提供了一种抗J亚群禽白血病病毒感染的表位疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

J亚群禽白血病是由J亚群禽白血病病毒(ALV-J)引起的一种肿瘤性传染病，临床上主要以髓细胞性白血病多见，多以免疫抑制、生长抑制和多器官组织出现肿瘤等为其主要特征。我国J亚群禽白血病的发生已相当普遍，临床病例从最初的商品肉鸡群发展到商品蛋鸡、地方种鸡群及其他家禽，并伴随着致瘤性增强及肿瘤多样性的发生。研究显示，我国的J亚群禽白血病毒呈现高感染率、高发病率，早期感染普遍、发病日龄明显提前，混合感染多发/频发，宿主范围扩展、肿瘤谱扩大，病理变化复杂化等特点，给我国的养禽业造成了巨大的损失。基于J亚群禽白血病毒囊膜蛋白的超变特性，加之自身的免疫逃避能力及宿主的免疫选择压力，使得禽白血病病毒的抗原变动性极大，成为其传统灭活疫苗、弱毒疫苗研制无法逾越的瓶颈。目前，临床上尚无相关药物及疫苗用于J亚群禽白血病的防控。国外通过净化控制本病的发生，由于净化周期长、成本高，在我国目前还未能有效实施，只能通过淘汰感染鸡只进行大群净化，无法控制ALV-J的感染，不断出现ALV-J大范围密集感染的报道，我国的J亚群禽白血病防控形势严峻。国内外均有过对于J亚群禽白血病的疫苗研发方法的报道，主要为传统的甲醛灭活疫苗、弱毒疫苗，基于SU的亚单位疫苗、核酸疫苗，这些疫苗在一定程度上可以对机体提供保护，但都会造成毒力恢复以及散毒的可能，免疫效果不稳定无法临床应用。基于以上现状，研制安全高效的表位疫苗对于J亚群禽白血病病毒的防控具有重大现实意义。

表位疫苗是近年发展起来成熟的新型疫苗，在人源病毒中研究深入。表位疫苗是利用基因工程手段，体外表达或人工合成病原微生物的表位，继而开发出预防性或治疗性疫苗。表位疫苗相对传统疫苗拥有较多优势，表位肽短小，免疫原性强，可以克服主要组织相容性复合体(MHC)分子的遗传限制，本身安全、无毒、稳定，可以直接刺激机体产生特异性免疫反应，其最大的优点就是可以克服传统疫苗造成的毒力恢复或散毒的可能，有着非常广阔的发展前景。目前，已开发出有效的艾滋病病毒、乙肝病毒、人类疱疹病毒等表位疫苗。ALV-J属于反转录病毒。病毒囊膜蛋白(env)可分为由gp85基因编码的表面蛋白(surface protein,SU)和gp37基因编码的跨膜蛋白(transmembrane protein，TM)，二者在一起形成二聚体，病毒囊膜蛋白决定亚群的特异性。gp85是病毒囊膜蛋白表面的主要成分，在ALV感染吸附宿主细胞并诱导机体产生特异性抗体中具有重要作用，含有众多的抗原表位，负责识别靶细胞膜上的特异性受体，TM主要负责介导病毒与细胞的融合过程。基于ALV-J的病毒特性，表位疫苗的研究成果为对抗ALV-J的超变特性，成功研制ALV-J疫苗提供了科学基础和技术支撑。

发明内容

针对现有技术中的相关情况，发明人考虑将表位疫苗应用于抗禽J亚群禽白血病病毒感染疫苗，进而经研究实验后提供了一种抗J亚群禽白血病病毒感染的表位疫苗，该疫苗采用原核表达后筛选纯化的高活性的重组蛋白His-cENV联合弗氏佐剂制备而得，其中编码重组蛋白His-cENV的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1所示，利用该表位疫苗免疫7日龄种禽雏鸡可以产生1:128000的中和抗体，体外病毒中和实验、动物实验显示该表位疫苗可中和不同ALV-J分离毒株，有效保护鸡群抵抗ALV-J毒株感染，该表位疫苗基于env来源的多表位抗原基因序列，克服了ALV-J的病毒变异，开辟了ALV-J疫苗新时代，提供了抗ALV-J感染的新手段，为ALV-J的防控提供了技术支撑。

发明人经研究发现ALV-J在整个env都存在不同的抗原表位，通过筛选env上的抗原表位可以开发有效的多表位疫苗。通过发明人前期对ALV-J的致病性进行了系统深入的研究，在系统解析其免疫抑制机制、跨种传播机制和免疫逃避机制的基础上，结合多表位可以传递广谱表位信息这一理念，最终制备了抗禽J亚群禽白血病病毒感染疫苗，可以避免由于病毒变异而造成的免疫失败，有利于提供更完全和更有针对性的免疫保护，表位疫苗的研究成果为的研制开辟了新的方向和重要的技术支撑。

本发明的具体技术方案如下：