[发明专利]一种检测胆汁淤积性黄疸致病基因的DNA文库及其应用

权利要求书

1.一种基于Ion Torrent_TM高通量测序技术诊断遗传性胆汁淤积相关疾病的DNA文库，其特征在于，该文库包括60个适用于包括中国人在内的黄色人种患者检测的遗传性病理性黄疸相关的致病基因，其中60个致病基因如下：

2.权利要求1所述的DNA文库在制备诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒用于诊断胆汁淤积性黄疸相关疾病。

3.权利要求1所述的DNA文库在制备诊断装置中的应用，其特征在于，所述诊断装置用于诊断胆汁淤积性黄疸相关疾病。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述诊断装置是测序芯片。

5.如权利要求2-4任一权利要求所述的应用，其特征在于，所述应用包括下列步骤：

(1)提供受试者样本的基因组DNA；

(2)利用权利要求1所述的DNA文库从Ion Torrent_TM高通量测序平台自动合成覆盖全部60个致病基因的扩增引物文库，对目标区域进行超多重PCR扩增；

(3)对步骤(2)得到的扩增产物进行酶切；

(4)对步骤(3)得到的酶切产物加Barcode接头；

(5)对步骤(4)得到的连接产物进行纯化；

(6)对步骤(5)得到的纯化产物用通用引物进行二次扩增；

(7)对步骤(6)得到的二次扩增产物进行片段选择及浓度测定，即建成患者目标区域扩增文库；

(8)对步骤(7)所得到的文库经过油包水PCR扩增反应后，将待测序目的片段连接于ISP珠子，得到反应液；

(9)将步骤(8)得到的包含ISP珠子的反应液点入芯片，上Ion Torrent_TM高通量测序进行测序；

(10)将步骤(9)得到的碱基序列信息进行生物信息学比对处理，得到与疾病相关的突变位点；

(11)对步骤(10)得到的突变位点进行Sanger测序法验证。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述样本来自受试者的外周血、体液、组织器官样本。

7.一种诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的DNA文库。

8.一种诊断装置，其特征在于，所述装置包括权利要求1所述的DNA文库。

9.如权利要求8的诊断装置，其特征在于，所述诊断装置是测序芯片。