[发明专利]一种针对PITPNM3的单克隆抗体及其用途

说明书

技术领域

本发明属于单克隆抗体领域，涉及针对CCL18(趋化因子配体18)功能受体PITPNM3的单克隆抗体，以及该单克隆抗体的用途。

背景技术

巨噬细胞是肿瘤微环境中最为重要的免疫细胞，巨噬细胞在不同的环境条件下会表现出不同的表型从而对肿瘤表现出截然不同的作用。而肿瘤相关巨噬细胞是由巨噬细胞在肿瘤微环境中诱导产生的。肿瘤相关巨噬细胞能促进肿瘤的迁移、转移和进展。而在针对肿瘤的治疗方案中，抗体靶向性治疗已逐渐发展成为恶性肿瘤治疗的重要组成部分。单克隆抗体作为特异强、靶向性好的药物在临床上具有非常高的应用价值和意义。然而单克隆抗体在临床治疗应用中的研究和进展却是相对滞后，因此有必要开发针对肿瘤微环境作用的单克隆抗体。

在前期研究中，发明人从人乳腺癌标本分离出肿瘤相关巨噬细胞，通过分析其细胞因子表达谱，发现CCL18(趋化因子配体18)是乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞分泌最多的细胞因子。体内外实验证实，CCL18除了直接促进肿瘤细胞与细胞外基质的粘附，诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化，从而促进肿瘤细胞转移，还诱导血管形成、募集幼稚T淋巴细胞将其诱导为免疫抑制Treg、诱导正常成纤维细胞分化为促肿瘤表型(Chen J*,Yao Y*,Gong C*,Yu F*,Sun S,Chen J,Liu B,Deng H,Wang F,Lin L,Yao H,Sun F,Karen S.Anderson,Liu Q,Mark E.Ewen,Yao X^#,Song E^#.CCL18from Tumor-Associated Macrophages Promotes Breast Cancer Metastasis via PITPNM3.Cancer Cell.2011,19(4):541–555.)。

发明人通过与CCL18免疫共沉淀和质谱分析锁定肿瘤细胞膜蛋白PITPNM3。CCL18和PITPNM3特异性结合在乳腺癌细胞的细胞膜表面。接着，发明人发现在乳腺癌细胞和幼稚淋巴细胞中敲低PITPNM3能抑制CCL18介导的信号通路激活和趋化运动。最后，发明人在稳定转染PITPNM3的HEK293细胞中通过多种公认鉴定细胞因子受体的方法证明PITPNM3是CCL18的功能受体。因此，有必要开发针对PITPNM3的单克隆抗体，可能为肿瘤细胞和间质细胞的靶向治疗提供新思路。

发明内容

本发明提供一种针对PITPNM3的单克隆抗体，它能在体内外模型中明显抑制肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌细胞的转移。

本发明所述的一种单克隆抗体，能特异性地识别趋化因子配体18功能受体PITPNM3，是由保藏号为CCTCC NO:C2014190的PITPNM3mAb杂交瘤细胞株所分泌的。该杂交瘤细胞株保藏单位为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址是中国湖北省武汉市武汉大学，保藏日期为2014年10月22日。

本发明还提供了所述的针对PITPNM3的单克隆抗体的用途。

本发明所述的用途是将所述的单克隆抗体用于制备抑制肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌细胞转移的药物的用途。

发明人通过专业软件分析挑选出16个抗原表位，然后针对这16个抗原表位研制出16个针对不同抗原表位的PITPNM3单克隆抗体。经过反复筛选验证，发明人发现其中一个针对PITPNM3胞外段的单克隆抗体，在共培养体系中加入PITPNM3单克隆抗体能明显抑制肿瘤相关巨噬细胞诱导肿瘤细胞的EMT、迁移和侵袭。在进一步的体内试验中，发明人验证了PITPNM3单克隆抗体的药效，通过建立人源化小鼠技术(1.Shicheng Su,Qiang Liu,Jingqi Chen,Jianing Chen,Fei Chen,Chonghua He,Di Huang,Wei Wu,Ling Lin,Wei Huang,Jin Zhang,Xiuying Cui,Fang Zheng,Haiyan Li,Herui Yao,Fengxi Su,Erwei Song.A positive feedback loop between mesenchymal-like cancer cells and macrophages is essential to breast cancer metastasis.Cancer Cell.2014,25,1–16.)的巨噬细胞促进肿瘤细胞的肝肺转移模型，即注射PITPNM3单克隆抗体后，发现其能明显抑制巨噬细胞促进肿瘤细胞的肝肺转移及延长荷瘤小鼠的生存期。

附图说明