[发明专利]将引物或引物、探针固定于固相载具用于PCR的方法无效
申请号: | 201410543747.1 | 申请日: | 2014-10-15 |
公开(公告)号: | CN104263640A | 公开(公告)日: | 2015-01-07 |
发明(设计)人: | 王蕾 | 申请(专利权)人: | 常州百代生物科技有限公司 |
主分类号: | C12M1/24 | 分类号: | C12M1/24;C12M1/00;C12Q1/70;C12Q1/68 |
代理公司: | 常州市夏成专利事务所(普通合伙) 32233 | 代理人: | 沈毅 |
地址: | 213000 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 引物 探针 固定 固相载具 用于 pcr 方法 | ||
1.一种将引物或引物、探针固定于固相载具用于PCR的方法,其方法如下:
步骤一、引物或引物、探针按相关主题溶解:引物、探针合成后,按引物、探针终浓度100uM 的需要量,加入缓冲液,短暂离心使加入的缓冲液全部沉积到PCR管(孔)底部,保证引物、探针充分溶解到缓冲液中,室温放置1h,形成母液;
步骤二、在无菌实验室里,将上下游引物分别从步骤一的100uM母液中取出10ul分装,再加入10-90ul 缓冲液稀释到10-50uM,形成使用液,4℃保存备用,根据进行的单重或者多重PCR反应需要,将该使用液加入固相载具的PCR反应管(孔)中;
其特征是:
步骤三、将已加入引物或引物、探针的固相载具放入烘箱中,直至将加入的液体水分蒸干,加入的引物或引物、探针即被贴壁固定,此时即形成固化的引物层或引物、探针层;
步骤四、将带有固化的引物层或引物、探针层的固相载具用膜封板,4℃保存,以待备用。
2. 根据权利要求1所述的将引物或引物、探针固定于固相载具用于PCR的方法,其特征是,所述步骤三中将已加入引物或引物、探针的固相载具放入烘箱中,该烘箱为普通烘箱或其它形式的加热烘干器具。
3. 根据权利要求1所述的将引物或引物、探针固定于固相载具用于PCR的方法,其特征是,所述步骤三中将已加入引物或引物、探针的固相载具放入烘箱中,烘干温度在35℃至95℃温度范围内,烘干时间为5分钟至3小时。
4. 根据权利要求3所述的将引物或引物、探针固定于固相载具用于PCR的方法,其特征是,所述烘干温度优选为50℃,烘干时间优选为2小时。
5.根据权利要求1所述的将引物或引物、探针固定于固相载具用于PCR的方法,其特征是,所述固相载具为48孔PCR板、96孔PCR板、384孔PCR板、8联管或单个PCR反应管。
6.根据权利要求1所述的将引物或引物、探针固定于固相载具用于PCR的方法,其特征是,所述固相载具的各个PCR反应管(孔)内可以添加不同或相同的引物层或引物、探针层。
7.一种固相载具,其特征是,使用上述权利要求1所制造的带有固化的引物层或引物、探针层的固相载具。
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