[发明专利]一种针对皮质醇的纳米抗体及其编码序列

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学或生物制药技术领域，尤其涉及一种针对于皮质醇分子的纳米抗体及其编码序列。

背景技术

皮质醇 (cortisol)，又称氢化可的松，是由肾上腺皮质束状带所分泌的一种类固醇激素或糖皮质激素。皮质醇的主要功能作用是通过糖异生增加血糖，控制免疫系统以及有助于机体对脂肪、蛋白质和碳水化合物的代谢。皮质醇的分泌主要受垂体分泌的促肾上腺皮质激素的调节，在压力和低血糖的情况下被分泌，其分泌有明显的昼夜节律，上午8时左右分泌达高峰，以后逐渐下降，午夜零点最低。血浆皮质醇正常值：上午8～9时(442±276) nmol/L，下午3～4时(221±166) nmol/L。皮质醇在应付压力中扮演重要角色，故又被称为“压力荷尔蒙”，皮质醇过高会导致库兴氏综合症，过低则会导致爱迪生氏病。肾上腺皮质因增生、腺瘤、癌变等所致的皮质醇增多症患者，其血浆、24小时尿以及唾液中皮质醇含量均明显增高，昼夜节律消失。垂体ACTH癌和异位ACTH综合征患者由于ACTH分泌增多，可致血浆皮质醇相应升高。各种原因所致的高糖皮质类固醇激素结合蛋白(CBG)血症血浆皮质醇水平明显增高。皮质醇在肥胖症以及心肌梗死、脑血管意外、休克等危重疾病亦可升高。因此利用针对皮质醇的纳米抗体来研发快速检测试剂盒具有重要的意义。

普通的抗体蛋白由两条重链和两条轻链组成，而从骆驼血液中发现的新型抗体只有两条重链，没有轻链，这些“重链抗体”能像正常抗体一样与抗原等靶标紧紧结合，但不像单链抗体那样相互黏连聚集成块。以该“重链抗体”为基础的纳米抗体不仅分子量只是普通抗体的1/10，而且化学性质也更加灵活，稳定性好，可溶性高，表达容易且容易获得，并容易偶联其他分子，单域抗体也称为纳米抗体。研发皮质醇纳米抗体可以快速有效的进行病理检测。

发明内容

本发明所解决的技术问题是：

提供一种针对皮质醇的纳米抗体，同时提供该纳米抗体的编码序列及该纳米抗体在制备检测的应用。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

提供一种皮质醇的纳米抗体,其VHH链包括框架区FR和互补决定区CDR，所述框架区FR包括FR1、FR2、FR3、FR4的氨基酸序列，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1所示FR1，SEQ ID NO:2所示FR2，SEQ ID NO:3所示的FR3，SEQ ID NO:4所示的FR4；所述互补决定区CDR包括 CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:5所示的CDR1，SEQ ID NO:6所示的CDR2，SEQ ID NO：7所示的CDR3。

此外，上述皮质醇纳米抗体的VHH链具有SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。

还提供一种DNA分子，它用以编码上述的皮质醇纳米抗体的VHH链，其核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示。

除此之外，还提供一种表达载体，它包含上述DNA分子的核苷酸序列，还有一种宿主细胞，它可以表达上述皮质醇的纳米抗体。

最后本发明还提供了皮质醇纳米抗体用于检测皮质醇分子的用途。

本发明的有益效果是：与现有技术相比，本发明的优点如下：

本发明采用皮质醇免疫新疆双峰驼，随后利用该骆驼外周血淋巴细胞建立了针对皮质醇的纳米抗体基因库，将皮质醇偶联在酶标板上，以此形式的抗原利用噬菌体展示技术筛选免疫性的纳米抗体基因库，从而获得了针对皮质醇特异性的纳米抗体基因，将此基因转入大肠杆菌中，建立了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株，根据序列比对软件分析各个克隆株的基因序列，最终获得皮质醇纳米抗体VHH链的氨基酸序列。

附图说明

图1 一株皮质醇纳米抗体通过镍柱树脂亲和层析纯化后，经SDS-PAGE电泳图。

具体实施方式

下面将结合说明书附图，对本发明作进一步的说明。

本发明首先采用皮质醇免疫一只新疆双峰驼，经过 6次免疫之后提取该双峰驼外周血淋巴细胞并构建了皮质醇特异的单域重链抗体文库。将皮质醇偶联在酶标板上，展示蛋白质的正确空间结构，使得皮质醇的抗原表位得以暴露出来，以此形式的抗原利用噬菌体展示技术筛选皮质醇免疫性的纳米抗体基因库（骆驼重链抗体噬菌体展示基因库），而获得了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明：