[发明专利]一种库尔勒香梨果实细胞切片立体染色方法

说明书

本专利发明了一种库尔勒香梨细胞切片立体染色方法，其特征是将5%苏木精无水乙醇溶液、10%三氯化铁溶液、碘‑碘化钾溶液和30%过氧化氢溶液按照一定的比例混合后对库尔勒香梨果实细胞切片进行染色，将细胞壁染成褐色，细胞核染成紫黑色，石细胞染成淡黄色至褐色，输导组织染成淡褐色，各部位细胞清楚可见、区分明显，实现了立体染色效果。解决了传统染色方法染色时间不易把握，石细胞和输导组织细胞模糊不清楚，果肉细胞边界不明显的缺陷。可应用于库尔勒香梨果实生长发育各时期细胞的研究。本专利发明试验方法操作简单，节约时间；节省材料，不用盖玻片就能观察；也可经二甲苯处理后制作成永久切片，用于科研教学领域。

技术领域

本专利发明了一种库尔勒香梨果实切片立体染色方法，其特征是将5%苏木精无水乙醇溶液、10%三氯化铁溶液、碘-碘化钾溶液和30%过氧化氢溶液按照一定的比例混合后对常规石蜡切片法处理好的库尔勒香梨果实切片进行染色，观察表皮细胞、果肉细胞、石细胞和输导组织细胞的生长变化，研究库尔勒香梨果实内各种细胞发育过程，为库尔勒香梨施肥配方筛选，良种选育提供技术支持。

背景技术

库尔勒香梨是新疆的名、优、特色水果，栽培历史已有1400多年，产于新疆东南部巴州境内的孔雀河畔，主要分布在巴州地区的库尔勒市、轮台县、尉犁县和农二师28,29,30,31,32,33,34,35团场。从1995年至今，库尔勒香梨种植面积每年以0.32066万hm²的规模迅速扩展，截止2002年已达3万hm²，产量达20多万吨。随着西部大开发战略的实施和自治区农业产业结构的调整，香梨作为特色产业步入大面积发展的新阶段，到2014年香梨种植面积已经超过了10万hm²，其种植面积和范围仍在不断扩大。随着库尔勒香梨种植面积的增大，也产生了一系列问题，尤其是农民为了追求库尔勒香梨的高产量，在种植管理过程中过多的施用化肥，有机肥施加的少，管理技术落后等原因导致了香梨石细胞比例比较大，降低了库尔勒香梨的品质。因此，需要一种快捷、简便的库尔勒香梨果实细胞染色方法，便于研究库尔勒香梨果实细胞发育过程，为库尔勒香梨栽培生产中的施肥配方筛选、管理技术改进和良种选育提供依据。目前能用于库尔勒香梨果实细胞的染色技术较少，而疆内的技术人员在对库尔勒香梨果实的研究过程中所用的方法主要是番红-固绿双重染色法，番红溶液能将库尔勒香梨果实细胞切片中木质化、栓质化和角质化的细胞染成红色，再经固绿溶液染色后，细胞壁和部分原生质被染成绿色，石细胞为紫红色至紫黑色。但番红-固绿染色方法操作比较复杂，需要经过一系列的乙醇、二甲苯梯度处理，操作时间较长，染色和脱色时间不容易把握，而且对库尔勒香梨果实的石细胞染色较重，石细胞表面结构模糊不清楚，石细胞核内结构完全看不到，果肉细胞有时被染成绿色，输导组织完全看不清楚。

发明内容