[发明专利]膜联蛋白A3在制备靶向杀伤肝癌干细胞药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学、细胞生物学、肿瘤免疫学和肿瘤免疫治疗学领域，涉及膜联蛋白A3(ANXA3)的新用途，具体是涉及ANXA3在制备靶向杀伤肝癌干细胞药物中的应用。

背景技术

目前认为，肿瘤的复发和转移与一群被称之为“肿瘤干细胞”的异质性细胞有关，它们具有自我更新、分化和诱发肿瘤形成的能力。许多研究结果表明，肿瘤干细胞对常规的放化疗不敏感，易产生耐受，因此传统的放化疗主要是杀灭普通的肿瘤细胞，而对肿瘤干细胞却没有杀伤作用，这些肿瘤干细胞从而得到富集，继而获得增殖优势，最终引发肿瘤的复发和转移。

我国是肝癌的高发地区，发病率高居全球第一位，已成为世界上肝癌发病及死亡人数最集中的国家，统计表明，我国肝癌死亡率在九大恶性肿瘤中居第二位，而且呈上升趋势，是一种严重威胁我国人民生命健康的重大疾病。尽管目前肝癌的诊断和治疗方法有了很大的进步，但是肝癌患者的长期生存率仍然很低，这与肝癌的易复发和转移的生物学特性有关。因此迫切需要研发一种新的有效的靶向杀伤肿瘤干细胞的免疫治疗方法，对降低肿瘤的复发和转移具有重要的作用。

最近，许多研究表明负载肿瘤干细胞抗原的DC细胞刺激活化的细胞毒性T细胞(CTL细胞)能靶向杀伤肿瘤干细胞。Pellegatta等首次证实(Pellegatta S,et al.Neurospheres enriched in cancer stem-like cells are highly effective in eliciting a dendritic cell-mediated immune response against malignant gliomas.Cancer Res.2006；66:10247-10252)，从神经胶质瘤细胞系GL261培养的肿瘤干细胞中制备细胞裂解物负载小鼠骨髓来源的DC细胞，对荷瘤小鼠进行免疫，可以治愈60％由神经球肿瘤干细胞诱导成瘤的小鼠及80％由原始细胞系GL261诱导成瘤的小鼠。而负载原始细胞系GL261的DC肿瘤疫苗仅能治愈50％由GL261诱导成瘤的小鼠，不能治愈由肿瘤干细胞诱导成瘤的小鼠。这项研究初步展示了以肿瘤干细胞制备的肿瘤抗原负载的DC肿瘤疫苗具有更强的抗肿瘤作用。Mine等人发现(Mine T,et al.Breast cancer cells expressing stem cell markers CD44+CD24 lo are eliminated by Numb-1 peptide-activated T cells.Cancer Immunol Immunother.2009；58(8):1185-94.)，采用CD44+CD24low的乳腺癌干细胞高表达蛋白Numb-1多肽诱导的CTL细胞，可以有效地杀伤针对吉西他滨、紫杉醇以及5-氟尿嘧啶具有耐药性的乳腺癌干细胞，证实免疫治疗对于耐药性的肿瘤干细胞可能具有更好的治疗效果。Weng等人(Weng D,et al.Induction of cytotoxic T lymphocytes against ovarian cancer-initiating cells.Int J Cancer 2011；129:1990-2001.)则将CD44+的卵巢癌干细胞与DC细胞融合，诱导的CTL细胞可以分泌更高水平的IFN-γ，并更好地杀伤CD44+的卵巢癌干细胞。另外，DC细胞负载DNAJB8抗原诱导的特异性CTL细胞能有效地杀伤肠癌干细胞(Morita R,et al.Heat shock protein DNAJB8 is a novel target for immunotherapy of colon cancer-initiatingcells.Cancer Sci 2014；105:389-395.)。这些研究说明，以DC细胞为基础的肿瘤疫苗，可以有效激活机体自身的抗肿瘤的免疫反应，对术后残留的肿瘤细胞进行监视及杀伤，甚至对发生转移的肿瘤细胞也有杀伤作用。因此，作为肿瘤治疗的一种有效辅助治疗手段，DC肿瘤疫苗在临床应用上显示出良好的治疗前景，基于负载肿瘤干细胞抗原的DC细胞诱导的CTL细胞可以有效地杀伤肿瘤干细胞。