[发明专利]从叉子圆柏中同时制备高纯度鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从天然植物中制备活性成分的方法，具体涉及从叉子圆柏中同时制备高纯度鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素的方法。

背景技术

叉子圆柏，又名沙地柏、爬柏、臭柏、双子柏、新疆圆柏。系柏科圆柏属植物，匍匐灌木，主要分布于欧洲南部至中亚和我国西北部等干旱贫瘠环境中，耐旱性强，可作为水土保持及固沙造林的优良树种。叉子圆柏因具有杀虫、杀菌、抗肿瘤、抗病毒等药用价值而被广泛关注。叉子圆柏中的有效组分可分为精油和非精油两部分。精油部分以萜类为主，包括单萜类、二萜类、倍半萜类以及多萜类；非精油部分中成分较为复杂，其中以木脂素类和多酚类(包括黄酮类)化合物为主，并含有少量的香豆素类物质、有机酸和甾醇等。木脂素类化合物是一类由苯丙素衍生物(C6-C3)聚合而成的天然化合物活性成分，是植物小分子量次生代谢产物，多以二聚体的形式存在，少数为三聚体和四聚体，具有结构多样性和广泛的生物活性，在植物体内大多呈游离状态，也有与糖结合成甙存在于植物的树脂状物质中，所在部位各异，分布于植物的根、茎、叶、花、果实等部位。从叉子圆柏中分离出的木脂素类化合物中又以鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素的含量最高。

对于鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素的分离和纯化，现有技术一般采用柱层析和重结晶精制(中国专利申请CN101967151A；CN101503410A；CN101805348A)，工艺方法上存在着分离、纯化步骤繁多、复杂的问题。由于鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素的结构和性质十分相近，纯化难度大，分离后虽然其纯度可进一步提高，但得率大幅下降，而且由于采用了层析柱，设备投资较大，操作烦琐，溶剂消耗量大，柱层析时还会使样品容易被不可逆吸附在柱填料上而损失，并且由于木脂素类化合物的结构不稳定性，在固体填料上还会发生开环和异构化等反应，因而分离效率较低。而高速逆流色谱是新型的现代色谱分离技术，它是基于运转螺旋管内两相溶剂的单向性流体动力学现象而获得高效率分离的色谱系统，是一种连续的无需任何固体填料的高效、快速的液—液分配色谱分离技术，避免了因固体填料带来的样品不可逆吸附、沾污和变性等各种问题，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和，而且节约溶剂，分离结果能达到相当高的纯度。迄今为止，尚未见文献和专利报道从较低纯度的叉子圆柏的乙醇提取浸膏中，直接采用高速逆流色谱法同时分离纯化制备鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素的方法。

发明内容

本发明的目的在于解决以上提出的问题，提供一种从叉子圆柏中同时制备高纯度鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素的方法，该方法操作简便、分离效率高。

一种从叉子圆柏中同时制备高纯度鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素的方法，包括以下步骤：

(1)将叉子圆柏粉碎成粗粉，以乙醇水溶液进行提取，得到的提取液浓缩后，冷冻干燥得到乙醇提取浸膏；

其中，所述的叉子圆柏选用叉子圆柏的茎、叶或果实(球果)；所述的乙醇水溶液的质量百分比为70～95％；所述的提取方法为冷浸和渗漉；

(2)以溶剂A、溶剂B、溶剂C和溶剂D组成高速逆流溶剂系统，将所述高速逆流溶剂系统充分混合后静置，按上下两相分开，取上相为固定相，取下相为流动相；

其中，溶剂A为卤代烷烃或脂肪烷烃；

溶剂B为脂肪酸酯；

溶剂C为脂肪醇；

溶剂D为水或者脂肪酸的水溶液；

(3)将步骤(2)得到的固定相用气压方式压入并充满高效逆流色谱仪的主机工作鼓，开启逆流色谱仪，使主机转动，用流量泵泵入步骤(2)得到的流动相，取步骤(1)得到的乙醇提取浸膏溶解于流动相中进样，分别收集鬼臼毒素的洗脱液和脱氧鬼臼毒素的洗脱液，浓缩后得到所述的鬼臼毒素和所述的脱氧鬼臼毒素。

本发明提供的方法，以高速逆流色谱作为分离装置，实现了结构和性质十分相近的木脂素类化合物鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素的同时分离和纯化，也为天然药用植物质量控制所需要的高纯度对照品的制备提供一种实用的新技术方法。

作为优选，所述的卤代烷烃为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷中的至少一种，包括任一种或任意种以任意比例混合的混合物。

作为优选，所述的脂肪烷烃为正戊烷、正己烷、正庚烷、正辛烷、石油醚中的至少一种，包括任一种或任意种以任意比例混合的混合物。

作为优选，所述的脂肪酸酯为乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯中的一种或任意两种等容积的混合物；作为进一步的优选，所述脂肪酸酯为乙酸乙酯。