[发明专利]编码酰基‑CoA合成酶同源物的多核苷酸及其用途

说明书

本申请是申请日为2011年2月1日、申请号为201180007631.0(国际申请号为PCT/JP2011/052035)、名称为编码酰基-CoA合成酶同源物的多核苷酸及其用途的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及编码酰基-CoA合成酶同源物的多核苷酸及其利用方法。

背景技术

含有2个以上不饱和键的脂肪酸总称为多不饱和脂肪酸(PUFA：polyuns aturated)，已知有花生四烯酸(ARA)、二高γ-亚麻酸(DGLA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等。多不饱和脂肪酸中存在在动物体内无法合成的多不饱和脂肪酸。因此，对于此种多不饱和脂肪酸，作为必需脂肪酸需要从食物中摄取。

多不饱和脂肪酸分布广泛，例如花生四烯酸可从由动物的肾上腺、肝脏中提取的脂质中分离。但是，动物脏器中所含有的多不饱和脂肪酸为少量，仅从动物脏器中分离提取，不足以进行大量供给。因此，不断在开发通过培养各种微生物以生产多不饱和脂肪酸的方法。其中，被孢霉属(Mortierella)微生物作为生产包含花生四烯酸等多不饱和脂肪酸在内的脂质的微生物而广为人知。

此外，还进行了在植物体内生产多不饱和脂肪酸的尝试。已知多不饱和脂肪酸构成三酰甘油等的贮藏脂质，在微生物的菌体内或植物种子中积累。

酰基-CoA合成酶(ACS)是使脂肪酸和辅酶A(CoA)进行硫酯化的酶，催化以下反应。

脂肪酸+CoASH+ATP→酰基-CoA+AMP+Ppi

通过ACS生成的酰基-CoA参与包括脂质的生物合成、重构、通过β‐氧化产生能量、蛋白质的酰化、通过脂肪酸的表达调节等各种生命现象。此外，还报道了ACS参与从细胞外摄取脂肪酸、细胞内的脂肪酸输送等(非专利文献1及2)。鉴于以上内容，认为利用微生物、植物生产多不饱和脂肪酸等时，控制ACS的活性非常重要。

已知在作为真核模式生物的酵母(酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))中有6个酰基-CoA合成酶基因(ScFAA1、ScFAA2、ScFAA3、ScFAA4、ScFAT1、ScFAT2)(非专利文献1)。由这些基因编码的蛋白质在底物特异性、表达时期、细胞内的定位及功能上不同。

在专利文献1中，作为来自裂殖壶菌属(Schizochytrium sp.)的酰基-CoA合成酶基因(ScACS)记载了9个基因。此外，在专利文献1中，记载了编码裂殖壶菌属PUFA合酶系的基因和ScACS共表达时与不和ScACS共表达时相比，DPA(n-6)(二十二碳五烯酸(n-6))、DHA的产生增加。

其他，也报道了来自动物及植物的酰基-CoA合成酶基因(非专利文献2及专利文献2)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:日本特表JP2009-529890公报

专利文献2:国际公开公报WO0209295公报

非专利文献

非专利文献1:B.B.A.1771,286-298,2007

非专利文献2:Exp.Biol.Med.,233(5),507-521,2008

发明内容

在上述情况下，希望分离出在宿主细胞中表达时使该宿主细胞的脂肪酸生产量增加或使所产生的脂肪酸的组成改变的新型基因。

本发明者深入研究的结果，成功地克隆出了编码作为脂质生产菌的高山被孢霉(Mortierella alpina)(以下为“M.alpina”)的ACS同源物(MaACS)的基因，从而完成了本发明。即本发明提供以下多核苷酸、蛋白质、表达载体、转化体、使用该转化体的脂质或脂肪酸组合物及食品等的制造方法以及根据该制造方法制造的食品等。

即本发明如下。

[1]一种多核苷酸，其特征在于，为选自以下(a)～(e)中任一项所述的多核苷酸：