[发明专利]一种硅胶柱层析法分离纯化鱼卵中卵磷脂的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分离提取技术领域。具体涉及一种硅胶柱层析法分离纯化鱼卵中卵磷脂的方法。

背景技术

磷脂（Phospholipid），也称磷脂类、磷脂质，是一类含磷酸根脂质的总称，属于复合脂质。磷脂在植物种子、动物脏器、血液、卵巢、蛋黄及细菌中与油脂并存，是生物细胞构成的必需物质，也是生命的基础物质之一。

一般磷脂组成成分包括：卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酰肌醇。其中，卵磷脂是磷脂的主要组成成分，同时具有亲水性磷酸脂酪基、胆碱或胆胺等(极性基团)和疏水性脂肪酸基(非极性基团)，因此卵磷脂是一种两性表面活性剂。具有分散、润湿、溶解、消泡等作用，在营养和保健方面也起着非常重要的作用，能预防和治疗高胆固醇和高脂血症，缓解糖尿病的病情等功能，因此，卵磷脂是目前公认的最具有生物学活性的磷脂，在食品、医药、化妆品和饲料及其它工业部门都有着广泛的应用。

海洋食品加工副产物鱼卵等下脚料中含有丰富的磷脂，而且卵磷脂占比较高，且相比传统动植物来源磷脂，其结构中富含有不饱和脂肪酸。为增加海洋食品加工企业加工下脚料的经济附加值，可以开发上述资源用于提取富含不饱和脂肪酸的卵磷脂，增加相关产业的经济附加值。

柱层析的固定相分为氧化铝与硅胶两大类。由于氧化铝柱不能再生，无法重复使用，硅胶则成为最佳的固定相，流动相多种多样。因此，本专利采用硅胶柱层析的方法，从海洋食品加工副产物中分离纯化得到高纯度的卵磷脂，为海洋食品加工企业产业链的发展提供参考依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种硅胶柱层析法分离纯化卵磷脂的方法，可以从海洋加工副产物鱼卵中提取高纯度的卵磷脂。

本发明采取的技术方案如下：

（1）卵磷脂的提取：将鱼卵匀浆后，取匀浆后的鱼卵，用丙酮以1:5~1:9w/v的料液比浸提35~45min，抽滤后的滤饼用质量比为90~98%的乙醇，以料液比1:5~1:9w/v浸提，提取温度30~45℃，超声辅助萃取15~25min，超声波功率为300-500w，脉冲间隔1~5s，提取1~3次后抽滤，浓缩干燥得到卵磷脂粗品。

（2）卵磷脂的纯化：将卵磷脂粗品溶于异丙醇中，用柱层析法进行纯化，以200-300目柱层析硅胶为固定相，流动相：异丙醇-甲醇作为洗脱剂，异丙醇-甲醇的体积比为1:1-1:3，流速控制在2-4mL/min，洗脱液用TLC板定性分析，收集卵磷脂馏分，然后浓缩干燥，即得到卵磷脂产品。

本发明方法的优点：

（1）本发明硅胶柱层析中的流动相采用异丙醇/甲醇体系，分离效果好；

（2）本发明方法中的洗脱剂回收率高，成本价格低；

（3）本发明方法得到的产品纯度高，且无毒；

（4）本发明方法可为医药品，保健品和化妆品等产品提供含不饱和脂肪酸比例高达39.15%的高纯度卵磷脂。

具体实施方式

实施例1

（1）取30g匀浆后的鱼卵，丙酮与鱼卵以1:5的料液比浸提35min，抽滤后滤饼用90%的乙醇，在料液比1:5，提取温度30℃的条件下，超声辅助萃取15min，超声波功率为300w，脉冲间隔2s，提取1次，抽滤；

（2）浓缩干燥：将乙醇提取液经40℃下减压浓缩后，置于45℃真空干燥得到粗磷脂2.1g；

（3）分别将2.1g粗磷脂溶于异丙醇，氯仿和95%乙醇中，以2mL/min流速倒入硅胶柱中，分别采用三种洗脱体系，包括异丙醇-甲醇溶液（1:1），氯仿-甲醇（1:1）和95%乙醇。用TLC板检测样品的洗脱顺序。通过TLC分析，把与标准品卵磷脂有相同R值的PC馏分收集在一起，减压浓缩至膏状，真空干燥得到的卵磷脂的纯度分别为：92%，93.12%，87.22%；说明氯仿-甲醇体系洗脱效果最好，但是鉴于氯仿毒性较大，不宜用于卵磷脂的纯化。综合，选择异丙醇-甲醇洗脱体系为最佳洗脱条件。

实施例2

（1）取30g匀浆后的鱼卵，丙酮与鱼卵以1:7的料液比浸提40min，抽滤后滤饼用95%的乙醇以7的料液比，45℃超声辅助萃取20min，超声波频率400w，脉冲间隔3s，反复提取2次，抽滤；

（2）浓缩干燥：将乙醇提取液经45℃减压浓缩后，置于50℃真空干燥得到粗磷脂2.5g；