[发明专利]以生物柴油副产物粗甘油为碳源的微生物油脂制备方法

权利要求书

1.一种以生物柴油副产物粗甘油为碳源的微生物油脂制备方法，其特征在于 ：该方法 具体步骤如下 ： （1）将活化好的粘红酵母放入灭菌后的葡萄糖接种培养基中，在摇床中培养 24 小时 ；所述步骤（1）中的葡萄糖接种培养基的pH为5.8-6.0，葡萄糖接种培养基灭菌的 温度为 121℃，灭菌时间为 30min，摇床培养时，摇床的转速为 180-220r/min；

（2）将步骤（1）中培养好的接种液按一定比例加入到灭菌后的粗甘油发酵培养基中，在 摇床中培养数天 ；

（3）将步骤（2）中发酵后得到的粘红酵母放在离心机中，在一定的转速下离心，取下层 细菌放入烘箱中，在一定温度下烘干至恒重 ；

（4）将步骤（3）中得到的烘干后的粘红酵母放入离心管中，加入一定量的盐酸，置于振 荡器混匀后在室温放置一段时间，再在沸水浴中煮一定时间，然后放入 -20℃的冰箱速冷将 粘红酵母菌体破碎 ；

（5）将步骤（4）中破碎后的菌液中加入 2 倍体积的氯仿 - 甲醇溶液，震荡混匀，放入离 心机中在一定转速下离心，取下层氯仿溶液转移至蒸馏瓶中，用旋转蒸发器挥发出氯仿层， 得到最终产品微生物油脂；其中，所述粗甘油发酵培养基的组成为 ：粗甘油 40g/L，（NH₄）₂SO₄5g/L， KH₂PO₄1g/L，酵母浸粉 0.5g/L，MgSO₄0.5g/L ；其中，粗甘油是以 NaOH、对甲苯磺酸或者离子 交换树脂作为催化剂，餐饮废油和混合甲乙醇制备生物柴油后剩余的混合液，混合液成分为 ：甘油40%，甲醇22%，乙醇13%，水20%，脂肪酸钠2%，脂肪酸酯2%，NaCl 1%；所述粘红酵母为粘红酵母 32489，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。

2.根据权利要求 1所述的以生物柴油副产物粗甘油为碳源的微生物油脂制备方 法，其特征在于 ：所述葡萄糖接种培养基的组成为 ：葡萄糖 20g/L，（NH₄）₂ SO₄5g/L，KH₂PO₄1g/L， 酵母浸粉 0.5g/L，MgSO₄0.5g/L。

3.根据权利要求 1 所述的以生物柴油副产物粗甘油为碳源的微生物油脂制备方法，其 特征在于 ：所述步骤（2）中接种液按 5%-10% 的比例加入到灭菌后的粗甘油发酵培养基中， 在摇床中培养 6-12 天，粗甘油发酵培养基的 pH 为 5.8-6.0，灭菌温度为 121℃，灭菌时间为30min，摇床转速为 180r-220r/min。

4.根据权利要求 1 所述的以生物柴油副产物粗甘油为碳源的微生物油脂制备方法，其 特征在于 ：所述步骤（3）中离心机的转速为 4000r/min，离心时间为 30min，烘箱中烘干温度 为 45-65℃。

5.根据权利要求 1 所述的以生物柴油副产物粗甘油为碳源的微生物油脂制备方法， 其特征在于 ：所述步骤（4）中，每克干菌体加入 4mol/L 的盐酸 6-10ml，室温放置时间为 20-30min，在沸水浴中煮 3-5min，放入冰箱速冷 30-40min。

6. 根据权利要求 1 所述的以生物柴油副产物粗甘油为碳源的微生物油脂制制备方法，其特征在于 ：所述步骤（5）中离心机的转速为 4000r/min，离心时间为 25-30min。