[发明专利]基于金黄色葡萄球菌的生物探针、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种基于金黄色葡萄球菌的生物探针，其特征在于，包括：

金葡菌载体以及标记在所述金葡菌载体的表面A蛋白上，且能够与被检测抗原特异性结合的抗体；

其中，所述金葡菌载体被四唑氯化物染料染至红色。

2.根据权利要求1所述的生物探针，其特征在于，所述四唑氯化物染料具体为5-氰基-2，3-二(4-甲基苯基)四唑氯化物。

3.一种根据权利要求2所述的生物探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)、利用LB平板划线分离出金葡菌，再利用LB液体培养基进行扩大培养，得到OD600为0.5-1.5的金葡菌悬液；

2)、在所述金葡菌悬液中加入四唑氯化物染料，并使得所述四唑氯化物染料的终浓度达到1-10mM，染色10-30min，得到红色菌悬液；

3)、将所述红色菌悬液依次进行离心收集菌体、缓冲液清洗、重悬以及灭活，得到红色的金葡菌载体悬液；

4)、将红色的所述金葡菌载体悬液与能够和被检测的抗原特异性结合的抗体混合后依次进行孵育、离心收集沉淀、缓冲液清洗以及重悬，得到标记有抗体的菌悬液；

5)、将所述标记有抗体的菌悬液中加入封闭剂后颠倒混匀，进行封闭处理，得到红色的生物探针。

4.根据权利要求3所述的生物探针的制备方法，其特征在于，在步骤4)中，所述抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体；

在步骤5)中，所述封闭剂包括脱脂奶粉或牛血清蛋白。

5.根据权利要求4所述的生物探针的制备方法，其特征在于，在步骤1)中：所述扩大培养的温度为35-39℃，转速为160-200rpm。

6.根据权利要求5所述的生物探针的制备方法，其特征在于，在步骤3)中：

所述离心的转速为3800-4200rpm，时间为3-7min；

所述清洗以及重悬均采用浓度为0.1M、pH为8.0的Tris-HCl，且所述清洗的次数为2-3次。

7.根据权利要求6所述的生物探针的制备方法，其特征在于，在步骤3)中：

所述灭活具体包括：在将所述重悬处理后的红色菌悬液中加入终浓度为1％的甲醛处理10-30min；

或，将所述重悬处理后的红色菌悬液在60-75℃温育15-50min。

8.根据权利要求3-7任一项所述的生物探针的制备方法，其特征在于，在步骤4)中：

能够和被检测的抗原特异性结合所述抗体的浓度为0.1-5mg/ml，且所述金葡菌载体悬液与所述抗体的体积比为1:50-500；

所述孵育的温度为37℃，时间为30min，转速为180rpm；

所述离心收集沉淀中，离心的温度为4℃，转速为4000rpm，时间为5min；

所述清洗以及重悬均采用浓度为0.1M，pH为8.0的Tris-HCl。

9.根据权利要求8所述的生物探针的制备方法，其特征在于，在步骤5)中：

每100毫升的所述标记有抗体的菌悬液加入的封闭剂的质量为0.1-5克。

10.权利要求3-7任一项所述制备方法获得的生物探针在肠出血性大肠杆菌O157:H7检测中的应用。