[发明专利]一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；将6 μL、0.5 ~ 2 mg/mL 酸中心复合物FA@PANI@CS-HCl分散液滴加到电极表面，室温下晾干成膜； 

（2）依次滴加6 μL的EDC/NHS溶液、6 μL的Ab-Ag@Co₃O₄抗体孵化物溶液于电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；所述EDC/NHS溶液是由0.1 mol/L 的EDC和0.1 mol/L 的NHS按照1 ~ 4 : 1的体积比混合制得；

（3）滴加6 μL、质量分数为0.5% ~ 2%的BSA溶液于电极表面，封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；

（4）滴加6 μL、0.0001~2 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干，制得一种基于酸中心复合物的免疫传感器。

2.如权利要求1所述的一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法，所述的酸中心复合物FA@PANI@CS-HCl分散液，其特征在于，制备步骤如下：

将0.4~2.0 mg的二茂铁甲酸FA与0.4~2.0 mg的盐酸掺杂的聚苯胺PANI混合，分散于1 mL、0.5~10 mg/mL的壳聚糖盐酸盐CS-HCl水溶液中，震荡超声24 h，混合均匀。

3.如权利要求1所述的一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法，所述Ab-Ag@Co₃O₄抗体孵化物溶液，其特征在于，制备步骤如下：

（1）Co₃O₄纳米片的制备

在磁力搅拌下，将2.0~3.0 g的CoCl₂·6H₂O溶于50~70 mL 超纯水中，制得CoCl₂水溶液；将20 mL、0.1~1.0 mol/L NaOH水溶液逐滴加入到CoCl₂水溶液中，继续搅拌5 min，得到棕色沉淀，离心，用超纯水和无水乙醇分别洗涤3次，在60 ℃真空干燥箱中干燥12 h，制得固体沉淀物，将其在300~500℃下煅烧1 h，逐渐降到室温，制得Co₃O₄纳米片；

（2）氨基化Co₃O₄的制备

将0.1 g 的Co₃O₄纳米片加入到10 mL的无水甲苯中，加入0.1~1 mL 的3-氨丙基三乙氧基硅烷，60~80℃回流1.5 h，离心，于110℃下干燥1 h，制得氨基化的Co₃O₄；

（3）Ab-Ag@Co₃O₄抗体孵化物溶液的制备

将50 mg的硝酸银溶于50 mL、质量分数为3~8 %的柠檬酸钠水溶液中，搅拌1 h；逐滴加入1~5 mL、0.1 mmoL/L的硼氢化钠水溶液，搅拌20~30 min，直至变为棕黄色，制得Ag纳米粒子溶液；将1 mg氨基化的Co₃O₄和30~70 mL的Ag纳米粒子溶液，充分混合，震荡离心，得到Ag@Co₃O₄；将1 mg的Ag@Co₃O₄加入到1 mL、0.1~5 μg/mL的抗体Ab溶液中，充分混匀，震荡24 h，制得Ab-Ag@Co₃O₄抗体孵化物溶液。