[发明专利]一种海洋微生物来源的萘醌类化合物、制备方法及其用途

权利要求书

1.一种萘醌类化合物CWL-168，其特征在于，系统命名为1,2,3,4-四氢-1,2,5-三羟基-6,7-二甲氧基-3-甲基-9,10-蒽酮，结构如下式所示，

2.权利要求1所述的萘醌类化合物CWL-168的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

菌种的准备：使用海水PDA培养基，高温灭菌，制成平板，置于常温状态下，接种产黄青霉Penicillium chrysogenum菌丝体培养，作为菌种；所述海水PDA培养基成分为马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15-20g，1L海水；

发酵种子液制备：在多个锥形瓶中分别装入海水PDA液体培养基，高温灭菌后，接种上述菌种培养，将该培养物作为种子液；

接种：采用固体发酵方式，准备发酵瓶，加入大米固体发酵培养基，高温灭菌，接种上述种子液，培养；所述大米固体发酵培养基为每1L的三角锥瓶装大米105g，小黄米45g；

萃取：待真菌发酵成熟后，加入乙醇溶液500mL/瓶浸泡发酵产物，发酵产物溶入乙醇溶液中，浸泡后，将上层乙醇溶液倒出，下层为固体发酵产物；加入新的乙醇溶液500mL/瓶，此步骤反复3次，每次浸泡常温过夜，如此制备得到乙醇初提液；以乙醇溶液为溶剂，采用高压乳化切割机分散提取下层的固体发酵产物，得到胞内提取物，然后与所得的乙醇初提液合并，用旋转蒸发仪浓缩至固态，即得到初级浸膏；

分离：将所得初级浸膏悬浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取液浓缩后，经硅胶柱层析，以氯仿-甲醇为洗脱剂，从体积比95:5-10:90进行梯度洗脱，其中梯度洗脱下来的组分在薄层层析中能用氯仿-丙酮-冰醋酸体积比为30:10:1溶液系统展开，再经Sephadex LH-20柱子纯化，用氯仿-丙酮体积比为5:2的溶液体系洗脱，洗脱液以15ml为一管，收集20管，挑取其中第9-12管合并，并浓缩至干后得到黄色粉末状化合物CWL-168。

3.权利要求2所述的萘醌类化合物CWL-168的制备方法，其特征在于，所述萃取中的乙醇溶液为体积分数为70％的乙醇水溶液。

4.权利要求2所述的萘醌类化合物CWL-168的制备方法，其特征在于，所述菌种的准备中，培养条件为28℃下静置培养4-5天。

5.权利要求2所述的萘醌类化合物CWL-168的制备方法，其特征在于，所述发酵种子液制备步骤中培养条件为28℃下以180rpm/min振荡培养2-3天。

6.权利要求2所述的萘醌类化合物CWL-168的制备方法，其特征在于，所述接种步骤中培养条件为28℃培养箱放置28天。

7.权利要求1所述的萘醌类化合物CWL-168或权利要求2-6任一所述方法制备得到的萘醌类化合物CWL-168在制备抗肿瘤药物中的用途。

8.权利要求7所述的在制备抗肿瘤药物中的用途，其特征在于，所述的肿瘤为人胃癌、人肺癌、小鼠黑色素瘤、人乳腺癌、人胰腺癌、人宫颈癌、人成骨肉瘤、人肝癌、人结肠癌、人喉癌。