[发明专利]病毒性心肌炎环肽疫苗及其制备方法

权利要求书

1.B3型柯萨奇病毒VP1环肽，其特征在于，其是通过蛋白质内含子反式剪接将B3型柯萨奇病毒结构蛋白VP1环化，即得VP1环肽。

2.权利要求1所述VP1环肽的制备方法，其特征在于，将B3型柯萨奇病毒结构蛋白VP1基因与蛋白内含子基因融合表达，以大肠杆菌为宿主，通过蛋白质内含子反式剪接将线状VP1蛋白环化获得VP1环肽。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白内含子包括但不限于Rma DnaB intein。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将Rma DnaB intein第388-428位氨基酸序列Ic及下游外显子第一个氨基酸残基Ser的编码基因序列与VP1编码基因的5′端融合，将Rma DnaB intein第1-105位氨基酸的编码基因序列I_N与VP1编码基因的3′端融合；

2)将融合蛋白的编码基因在大肠杆菌体内诱导表达，通过Rma DnaB intein的Ic和I_N的反式剪接将VP1蛋白的N末端和C末端通过肽键连接形成VP1环肽；

3)VP1环肽以包涵体形式存在于大肠杆菌内，裂解细胞后通过变性法以His-tag标签纯化得到VP1环肽。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在37℃下诱导表达融合蛋白。

6.病毒性心肌炎环肽疫苗，其特征在于，所述环肽疫苗是由权利要求1所述VP1环肽任选辅以药用赋形剂和/或佐剂组成。

7.根据权利要求6所述的环肽疫苗，其特征在于，所述环肽疫苗为液体剂型或冻干剂型。

8.权利要求6所述环肽疫苗的制备方法，其特征在于，将权利要求1所述VP1环肽任选与药用赋形剂和/或佐剂混合。

9.融合蛋白Ic-VP1-I_N，其特征在于，VP1为B3型柯萨奇病毒结构蛋白，Ic为Rma DnaB intein第388-428位氨基酸序列及下游外显子第一个氨基酸残基Ser，I_N为Rma DnaB intein第1-105位氨基酸序列。

10.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体中含有编码权利要求9所述融合蛋白的基因。