[发明专利]一种分析动物性食品中四类29种限用兽药残留的UPLC-MS/MS方法

说明书

一种分析动物性食品中四类29种限用兽药残留的UPLC‑MS/MS方法，其特征在于：采用改进的QuEChERS方法进行样品前处理，样品经McIlvaine缓冲液‑乙腈提取，提取液酸化、盐析，取少量乙腈相，用C18和NH2吸附剂分散固相萃取净化，净化液浓缩、定容后，采用超高效液相色谱‑串联质谱仪(UPLC‑MS/MS)检测。本发明方法解决了四环素类兽药难与其他多类兽药同时提取、净化的难题，同时简化了样品处理步骤，具有高效、快速、成本低、操作简便等优势，净化效果好，灵敏度高，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求。

技术领域：

本发明属于动物性食品中兽药残留的测定技术领域，涉及鸡肉、鸡肝、猪肉和猪肝样品中四环素类、金刚烷胺、磺胺类和喹诺酮类四类共29种限用兽药残留是否超标的测定方法，特别是，采用改进的QuEChERS方法作为测定前的处理方法。

背景技术：

兽药残留是指给动物使用药物后积蓄或贮存在动物细胞、组织或器官内的药物原形、代谢产物和药物杂质。兽药残留主要是由于不合理使用药物治疗动物疾病和作为饲料添加剂而引起。我国虽已制定《动物性食品中兽药最高残留限量》以及《饲料药物添加剂使用规范》，但目前养殖业中非法使用违禁兽药，滥用抗菌药和饲料添加剂的问题普遍存在，从而导致兽药在动物性食品中的残留事件时有发生，严重威胁着人们的生命安全，同时严重影响我国动物性食品出口贸易。

金刚烷胺、磺胺类、喹诺酮类和四环素类兽药是兽医临床上最常用且易被滥用的药物，农业部对上述兽药也制定了最大残留限量(MRLs值)规定。近几年，随着食品安全问题日益被重视，食品检验机构面临大量的检测工作。目前检测方法仍以单类兽药的检测为主，因此，样品需要重复处理，分别检测，耗时费力。实现多类兽药同时检测是许多兽药残留分析工作者努力的目标。

液相色谱-串联质谱法因具有高灵敏度和高选择性的优势，已成为复杂的动物组织样品中多类兽药残留同步检测的主流方法。已报道的兽药多残留方法有的同时检测喹诺酮类和磺胺类兽药，有的同时检测四环素类与喹诺酮类兽药。但是，由于四环素类兽药理化性质特殊，较难与其他多类兽药同时提取、净化，因此，尚未见四环素类与磺胺类、喹诺酮类、金刚烷胺等兽药同时检测的文献报道。此外，已报道的方法多采用固相萃取柱净化，检测成本也较高。

QuEChERS(Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged and Safe)方法快速、简便、成本低廉、易于操作，已逐步被应用于兽药残留检测。本研究借鉴QuEChERS方法的优势，对经典的QuEChERS方法做了改进，解决了四环素类兽药难与其他兽药同步检测的难题，同时简化了操作步骤，节约了检测成本，结合超高效液相色谱-串联质谱仪检测，建立了鸡肉、鸡肝、猪肉和猪肝样品中四环素类、金刚烷胺、磺胺类和喹诺酮类四类29种限用兽药的同步快速检测方法。该方法具有高效、快速、成本低、操作简便等优势，净化效果好，灵敏度高，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求，适用于各食品检测机构对动物性食品中兽药残留的日常监控。

发明内容：

本发明的目的在于克服四环素类兽药难与其他多类兽药同时处理的难题，同时，简化操作步骤，降低检测成本，公开一种采用改进的QuEChERS方法处理样品，分析包含四环素类在内的多类兽药残留的UPLC-MS/MS方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的，本发明所述的动物性食品中四环素类、金刚烷胺、磺胺类和喹诺酮类四类共29种兽药残留的测定方法，包括以下步骤：

a、准确称取匀浆好的样品2.00g(精确至0.01g)于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入2mL0.1mol/L Na₂EDTA-McIlvaine缓冲液，3mL乙腈，于旋涡混合器上涡旋2min，4000转/min，离心5min，收集提取液于另一50mL离心管中。

b、残渣加入5mL乙腈，于旋涡混合器上涡旋2min，4000转/min，离心5min，合并提取液。