[发明专利]DNA分离纯化方法及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术中的核酸纯化领域，特别是指一种DNA分离纯化方法及其试剂盒。

背景技术

传统的DNA纯化方法是用SDS(十二烷基磺酸钠)、TX-100、CTAB(cetyltrimethylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化铵)等试剂裂解细胞，然后经酚、氯仿(有毒性)抽提去除蛋白质，使DNA释放到上清中，上清液中的DNA再经乙醇或异丙醇沉淀回收。但是这样纯化的DNA中仍存留一部分蛋白质、多糖等物质，需采用其它形式的纯化方法进一步纯化DNA。如比格科技私人有限公司的公开号为CN102725407A，公开日为2012.10.10，名称为分离核酸的方法及其试剂盒的发明专利，即公开了如下的技术特征，一种从样本中分离核酸的方法，所述方法包括下列步骤：(a)将裂解缓冲液加入到含有核酸的样本中以得到裂解溶液；或者(b)将裂解缓冲液连同结合缓冲液一起加入到样本中以得到裂解溶液；(c)将结合缓冲液加入到步骤(a)的溶液中以使核酸与基质结合，或者使步骤(b)的溶液与基质直接结合；和(d)洗涤和洗脱与基质结合的核酸以分离和纯化核酸。

采用SDS(十二烷基硫酸钠)和氢氧化钠的溶解液溶解细胞，再用含有乙酸钾和乙酸的混合液中和溶解液，使大部分蛋白质沉淀下来，DNA溶解在上清液中。但是这种方法主要用于质粒DNA的分离纯化，如果用于抗凝全血中DNA的分离纯化，则根本不能使血红蛋白沉淀下来。

市场上其他公司已经商品化的血液DNA提取试剂盒，细菌DNA提取试剂盒均需要蛋白酶K消化步骤，价格昂贵，时间比较长。

发明内容

本发明提出一种DNA分离纯化方法及其试剂盒，解决了现有技术中无法快速分离纯化DNA的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种DNA分离纯化方法，所述方法包括下列步骤：

(a)将裂解缓冲液加入到含有DNA的生物样本中以得到溶解的生物样本缓冲溶液；然后剧烈摇晃缓冲溶液；

(b)在剧烈摇晃后的所述缓冲溶液中加入沉淀液，之后剧烈摇晃，离心，形成蛋白质沉淀和上清液；

(c)将所述的上清液加入纯化柱中，洗脱DNA。

作为优选的技术方案，所述裂解缓冲液选自氯化铵、硫氰酸铵、硫氰酸胍、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫氰酸钠、TX-114、十二烷基肌氨酸钠中的几种的混合物。其中氯化铵、硫氰酸铵、硫氰酸胍、硫氰酸钠溶解用作溶解生物样本中的蛋白质组分。磷酸二氢钠、磷酸氢二钠维持裂解缓冲液稳定的pH值。TX-114、十二烷基肌氨酸钠用作溶解生物样本中的脂质组分。

作为优选的技术方案，所述裂解缓冲液为：

1％-5％(g/g)磷酸氢二钠

0.1％-1％(g/g)磷酸二氢钠

1％-5％(g/g)十二烷基氨酸钠

1-2M氯化铵

1.5-2.5M硫氰酸铵 以及

3.5-5M硫氰酸胍。

作为优选的技术方案，所述裂解缓冲液为：

1.5％(g/g)磷酸氢二钠

0.5％(g/g)磷酸二氢钠

1.6％(g/g)十二烷基肌氨酸钠

1.5M氯化铵

2M硫氰酸铵以及

4M硫氰酸胍。

作为优选的技术方案，所述样本为生物样本。

作为优选的技术方案，所述生物样本为抗凝全血、唾液、细胞或细菌。

作为优选的技术方案，所述生物样本选自抗凝全血。

作为优选的技术方案，所述沉淀液选自氯化锌、硫酸钠、乙酸锌、氯化钠、氯化钾、硫酸锌、硫酸胍、乙酸钾、乙酸钠、乙酸胍、盐酸胍中的几种的混合物。其中氯化锌、乙酸锌、硫酸锌等物质提供锌离子作为蛋白组分的沉淀内核。硫酸钠、氯化钠、氯化钾等物质可促成蛋白组分盐析沉淀。乙酸钾、乙酸钠等物质维持沉淀液稳定的pH值。硫酸胍、乙酸胍、盐酸胍等物质维持沉淀液中含有高浓度的盐分。

作为优选的技术方案，所述沉淀液为：

5％-10％(g/g)乙酸钠或乙酸钾

2％-10％(g/g)乙酸

10％-50％(g/g)硫酸锌

1-2M氯化钾 以及

1-2M盐酸胍。

作为优选的技术方案，所述沉淀液为：

8％(g/g)乙酸钠或乙酸钾

5％(g/g)乙酸

15％(g/g)硫酸锌

1M氯化钾 以及

1.5M盐酸胍。