[发明专利]一种高盐和/或干旱诱导的启动子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中一种高盐和/或干旱诱导的启动子及其应用。

背景技术

DNA分子上，位于结构基因上游与RNA多聚酶结合，起始mRNA合成从而启动结构基因转录的一段序列，缺少这个部分，基因就不具备转录的功能，此序列即为启动子。真核生物的启动子一般在-25--35区有TATA盒，负责基因转录的起始位点，在-70--80含有CAAT序列，主要调控转录起始的频率。在启动子区还包括一些序列通过与反式作用因子相互作用控制基因的时空特异性表达。启动子是指导、调控基因表达的不可缺少的核苷酸序列，启动子是保证外源基因在转基因生物体内有效表达的首要因素，它将指导外源基因在宿主细胞内在适当的时间和特定的组织中进行表达，因此启动子是基因工程中一个重要的研究对象。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何使外源目的基因在高盐胁迫和/或干旱胁迫诱导下特异表达。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种高盐和/或干旱诱导的启动子。

本发明所提供的高盐和/或干旱诱导的启动子，名称为GmWRKY27P，是下述a)或b)或c)的DNA分子：

a)核苷酸序列为序列表中SEQIDNo.1的第10位-2216位的DNA分子；

b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA分子；

c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA分子。

其中，SEQIDNo.1由2224个核苷酸组成，第4位-9位为HindⅢ的识别位点，第2217位-2222位为BamHI的识别位点。

上述高盐和/或干旱诱导的启动子中，所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min；又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min。

本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的启动子核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明分离得到的启动子核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要保持了表达靶基因的启动子活性，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的启动子核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

上述高盐和/或干旱诱导的启动子中，所述启动子GmWRKY27P可通过载体介导的转化方法(如农杆菌介导和病毒介导法)、基因直接导入法(基因枪转化法、电激转化法、超声波法、显微注射法、激光微束法、PEG介导转化方法和脂质体法等)、种质系统法(花粉管通道法、生殖细胞浸染法、胚囊和子房注射法等)等常规生物学方法转化植物植株或器官或组织或细胞，得到转基因植物细胞或组织或器官或植株。

为解决上述技术问题，本发明还提供了与GmWRKY27P相关的遗传材料。

本发明所提供的与GmWRKY27P相关的遗传材料，为下述B1)至B19)中的任一种：

B1)含有GmWRKY27P的表达盒；

B2)含有GmWRKY27P的重组载体；

B3)含有B1)所述表达盒的重组载体；

B4)含有GmWRKY27P的重组微生物；

B5)含有B1)所述表达盒的重组微生物；

B6)含有B2)所述重组载体的重组微生物；

B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；

B8)含有GmWRKY27P的转基因植物细胞系；

B9)含有B1)所述表达盒的转基因植物细胞系；

B10)含有B2)所述重组载体的转基因植物细胞系；

B11)含有B3)所述重组载体的转基因植物细胞系；

B12)含有GmWRKY27P的转基因植物组织；

B13)含有B1)所述表达盒的转基因植物组织；

B14)含有B2)所述重组载体的转基因植物组织；

B15)含有B3)所述重组载体的转基因植物组织；