[发明专利]抗Ⅱ型糖尿病长效纳米复合肽及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于纳米生物技术领域，特别涉及一种抗Ⅱ型糖尿病长效纳米复合肽及其制备方法与应用。

背景技术

垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)是1990年被发现由脑垂体分泌的具有重要生物学功能的神经多肽，是促胰液素/高血糖素/VIP家族中的新成员。PACAP有两种存在形式：PACAP38，由38个氨基酸组成；PACAP27，由PACAP38氮端的27个氨基酸组成。PACAP通过激活其特异的G蛋白偶联受体，提高靶细胞cAMP等第二信使的浓度，从而发挥广泛而重要的生物学功能。PACAP有三类G蛋白偶联受体：PAC1、VPAC1和VPAC2；三类受体在生物体中分布不同，所起的作用也不相同。其中VPAC2型受体分布于胰岛等组织，与能量代谢密切相关，从临床观点看，作为VPAC2型受体特异激动剂的特定PACAP衍生物可有效地降低血液葡萄糖水平，保护β-细胞功能及阻止疾病发展的潜力，且无低血糖症风险，为公认的治疗Ⅱ型糖尿病的新型药物。

PACAP与VPAC2受体作用主要与腺苷酸环化酶(AC)藕联：通过cAMP信号传导通路，激活AC，催化ATP转化为cAMP，cAMP随之激活其依赖性蛋白激酶A(PKA)，PKA可使细胞内多种蛋白质磷酸化，产生生理效应，尤其是在促进相关基因转录有重要作用。PACAP通过VPAC2受体介导的生物学功能主要有：神经递质/调质、促进激素分泌，调节内分泌平衡；调节性腺功能和生殖细胞的产生；调节能量代谢平衡等。

研究表明，VPAC2型受体特异激动剂可有效促进葡萄糖依赖的胰岛素分泌，提高机体对高浓度血糖的应急能力有效降低血糖浓度，保护胰腺β细胞功能、增加β细胞数量和抑制β细胞凋亡。但PACAP及其许多衍生物，如DBAYL、BAY55-9837等，由于分子量较小(<6000Da.)，在体内由于肾小球的滤过作用，易被肾快速排泄和代谢，因此，其体内半衰期较短、生物利用度受到影响。

纳米硒(SeNPs)具有良好的生物相容性，在体内还具有清除自由基的功能，其逐渐被探索和初步应用于药物传输与治疗体系。壳聚糖是由(1,4)-linked2-amino-2-deoxy-β-D-glucose组成一种无毒可生物降解的阳离子多聚糖。壳聚糖与纳米粒子作用后仍然具有高分子聚合物的优良性能，如生物相容性、生物降解性、无毒性、成本低等。壳聚糖纳米粒子用于药物运载和治疗，越来越受到科研工作者的关注。

VPAC2型受体特异激动剂类活性多肽具有良好的葡萄糖依赖性降血糖作用，但往往分子量较小，其体内半衰期较短、生物利用度降低，若要长效发挥这些具有良好降血糖作用的活性多肽的生物学作用，把这些活性多肽与壳聚糖修饰的纳米载体粒子偶联作为新型药物体系，可有效改善多肽药物的水溶性和体内稳定性、控制药物的体内释放及靶向选择性，有效延长活性多肽药物的半衰期，具有重要的药用价值。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种抗Ⅱ型糖尿病长效纳米复合肽的制备方法。该制备方法生产效率高，生产成本低。

本发明的另一目的在于提供通过上述制备方法得到的抗Ⅱ型糖尿病长效纳米复合肽。该纳米复合肽Peptide-CS-SeNPs具有协同作用，具有更高稳定性、更长半衰期，Peptide指DBAYL、BAY55-9837等VPAC2受体特异激动剂类活性多肽。以纳米硒为载体，壳聚糖(Chitosan，CS)为连接linker，实现活性多肽与纳米硒粒子(SeNPs)的共价结合。

本发明的再一目的在于提供所述的抗Ⅱ型糖尿病长效纳米复合肽的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种抗Ⅱ型糖尿病长效纳米复合肽的制备方法，包括如下步骤：

(1)纳米硒粒子(SeNPs)制备

常温常压下，吸取抗坏血酸(Vc)溶液，逐滴加入Na₂SeO₃溶液，边加边摇匀，待颜色不再加深，转移到低温反应，得到纳米硒粒子溶液；

(2)多肽和壳聚糖偶联

称取多肽，用双蒸水溶解，再加入0.8mg/mL的壳聚糖(Chitosan，CS)溶液，搅拌反应，得到多肽-壳聚糖偶联物溶液；

(3)纳米复合肽Peptide-CS-SeNPs的制备

将步骤(1)制备的纳米硒粒子溶液和步骤(2)制备的多肽-壳聚糖偶联物溶液混合后，搅拌反应，反应完成后，于双蒸水中透析过夜，得到高纯度的抗Ⅱ型糖尿病长效纳米复合肽Peptide-CS-SeNPs。