[发明专利]一种脂肪酶

说明书

本发明提供了新的具有脂肪酶活性的多肽，其包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在上述序列中包含至少一个氨基酸取代、缺失或添加的序列。本发明还提供了编码所述多肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体和宿主细胞，以及生产上述多肽的方法。此外，还涉及上述具有脂肪酶活性的多肽的用途。

发明领域

本发明属于酶基因工程和酶工程领域，具体地，涉及具有脂肪酶活性的多肽、其编码核酸，以及包含所述编码核酸的表达载体和宿主细胞。本发明还涉及上述多肽的制备方法及其用途。

发明背景

脂肪酶是一类具有多种催化能力的酶，可以催化三酰甘油酯水解为甘油和游离脂肪酸，还可以催化其他酯类的水解和转酯化以及酯类的合成反应。此外，脂肪酶还表现出对底物的对映选择性。以上特性赋予了脂肪酶在食品油脂加工、洗涤剂、生物柴油、酯键化合物的合成和手性药物合成等工业的广泛应用(Abhishek Kumar Singh, MausumiMukhopadhyay.Overview of Fungal Lipase:A Review.2012, 166(2):486-520)。

例如，在油脂加工方面，由于脂肪酶的引入，油脂水解可在常温常压下进行，因此不会使高度不饱和脂肪酸和生育酚等生物物质变性。在乳品加工方面，应用脂肪酶在乳品中进行乳脂水解，可增强干酪、奶粉、奶油的风味，促进干酪的成熟，改善乳制品的品质。在面食加工方面，添加脂肪酶，使面食弹性提高，改善食感，提高面包的保鲜能力(王自社,张继,马君义,史睿.安徽农业科学.2011,39(7): 3798-3800)。在医疗方面，脂肪酶作为诊断工具，可预测疾病，如血清中脂肪酶可用于检测急性胰腺炎和胰腺损伤。脂肪酶在药物生产、减轻体重等方面也有应用。在生物柴油合成方面，酶法具有提取纯化工艺简单、设备投资少、耗能低、污染小等优点，日益引起人们的普遍关注，其中织物膜固定化的Novozym 435和Candida sp.99-125是生产生物柴油的常用酶。在洗涤工业方面，1988年，诺维信公司首先将含脂肪酶且能有效除去油污的洗涤剂推向市场，应用遗传工程开发出

脂肪酶广泛存在于动植物和微生物中，由于微生物不但种类多、繁殖快、易发生遗传变异，而且具有比动物更广泛的pH值、温度范围以及底物专一性，因此微生物脂肪酶是工业用脂肪酶的重要来源。据统计，产脂肪酶的微生物有65个属，主要集中在黑曲霉、假丝酵母、根霉、假单胞菌、链霉菌和碱假单胞菌等菌株(王自社,张继,马君义, 史睿.安徽农业科学.2011,39(7):3798-3800)。

脂肪酶在乳制品中使用可以产生香味，因此可以应用在乳酪制造中。传统上，使用来自山羊或小牛等反刍动物脂肪酶制剂。这些制剂来自这些动物的前胃组织，也被称作为前胃脂肪酶。市场上存在商业试剂C,L,KG and K(DSM Food Specialties,荷兰)。这些脂肪酶被用于多种意大利、西班牙、希腊和法国乳酪制备中，这些类型乳酪熟化期间特定香味谱的产生很大程度上归因于脂肪酶对乳脂肪的作用。脂肪酶催化乳脂肪的水解，产生游离脂肪酸。所述脂肪酸可以具有短链(C₄-C₆脂肪酸，即丁酸、己酸)和中到长链(C₁₂-C₁₈)脂肪酸。随后游离脂肪酸可参与化学反应，例如香味化合物，如乙酸乙酯、β-酮酸、甲基酮、酯和内酯的形成。香味组分中的脂肪酸的转化可以由来自乳酪中的微生物种群中的酶催化。

使用的脂肪酶可以影响乳酪中释放的游离脂肪酸的类型，例如，辛辣的、强烈的香味主要产生于释放短链脂肪酸(C₄-C₆)的脂肪酶，而中长链脂肪酸则会产生肥皂样的口味。所以许多研究致力于将脂肪酶改造为短链偏好型，以应用于乳酪制造。

发明概述

第一方面，提供了具有脂肪酶活性的多肽，其包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：

(a)如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，以及