[发明专利]鸭疱疹病毒1型UL7截短重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种病毒截短重组蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

鸭疱疹病毒1型(Anatid Herpesvirus1，AHV-1)属疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科、马立克病毒属，可引起鸭、鹅和天鹅等水禽发生一种急性、热性、接触性传染的败血性传染病，病鸭临床表现为精神沉郁，高热稽留，共济失调、下痢、流泪和部分病鸭头颈肿大，临床以急性败血症过程为主要特征，流行于世界大多数养鸭、鹅地区及野生水禽的主要迁栖地，传播迅速，发病率和死亡率可高达90％以上，常造成严重经济损失，严重威胁我国水禽养殖业的生存和发展。AHV-1抗原或抗体检测对其防治很关键。抗体检测的主要方法有琼脂凝胶扩散试验、中和试验(neutralization test，NT)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)测定法。其中，ELISA法广泛用于AHV-1抗体检测，可用于大批鸭群和鹅群抗体水平的监测以及基层单位检疫。但是，以往的ELISA方法使用全病毒作为包被抗原，全病毒抗原纯度有限、稳定性差、难以标准化，影响检测结果的准确性，且操作费时费力，进一步限制了该方法的大规模应用，因此，一种新型抗原的制备方法对建立特异敏感的检测方法从而防控AHV-1感染显得尤为重要。同样，抗原检测方法有中和试验、免疫荧光等，但检测试剂也涉及到特异性强的抗体且抗体(无论单抗还是多抗)的制备同样涉及到病毒抗原纯化的困难。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种AHV-1UL7截短重组蛋白，其具有与天然UL7蛋白相似的免疫反应活性，能够与AHV-1抗体特异性结合；目的之二在于提供该UL7截短重组蛋白的制备方法；目的之三在于提供该UL7截短重组蛋白在制备检测试剂中的应用；目的之四在于提供该UL7截短重组蛋白的多克隆抗体；目的之五在于提供该UL7截短重组蛋白的多克隆抗体在制备检测试剂中的应用。

经研究，本发明提供如下技术方案：

1.鸭疱疹病毒1型UL7截短重组蛋白，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.鸭疱疹病毒1型UL7截短重组蛋白的编码基因。

进一步，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.含有所述编码基因的重组表达载体。

4.含有所述重组表达载体的工程菌。

进一步，所述工程菌是将重组表达载体转入大肠杆菌BL21pLysS中而得到，所述重组表达载体是将核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的鸭疱疹病毒1型UL7截短重组蛋白的编码基因克隆入原核表达质粒pET-32a(+)中而得到。

5.利用所述工程菌制备鸭疱疹病毒1型UL7截短重组蛋白的方法，包括以下步骤：将工程菌接入含氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃振荡培养至OD₆₀₀达0.6，加入IPTG至终浓度为0.3mmol，37℃诱导培养3小时，收集菌液，离心，沉淀用20mmol pH8.0的Tris-HCl缓冲液悬浮，加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL，置-20℃过夜后，在冰浴条件下超声波间歇破碎菌体，离心，沉淀洗涤后，用8mol/L尿素溶液溶解，经孔径0.45μm的微孔滤膜过滤，透析复性，即得鸭疱疹病毒1型UL7截短重组蛋白。

6.鸭疱疹病毒1型UL7截短重组蛋白的多克隆抗体。

7.鸭疱疹病毒1型UL7截短重组蛋白在制备检测鸭疱疹病毒1型抗体的试剂中的应用。

8.鸭疱疹病毒1型UL7截短重组蛋白的多克隆抗体在制备检测鸭疱疹病毒1型抗原和/或UL7蛋白在鸭疱疹病毒1型感染宿主细胞中的定位和分布的试剂中的应用。

本发明的有益效果在于：本发明选取AHV-1UL7基因编码蛋白的主要抗原域(1aa-240aa)，利用原核表达系统成功制得了AHV-1UL7截短重组蛋白，该截短重组蛋白具有与天然AHV-1UL7蛋白相似的免疫反应活性，能够与AHV-1抗体特异性结合，可作为检测AHV-1抗体的试剂应用，由于该截短重组蛋白非全细菌，应用其进行检测时无散毒危险，且该截短重组蛋白的制备方法简单，适于工业化大规模生产，能够实现产品的标准化，利于不同实验室之间的结果比较。此外，本发明还通过动物免疫制备了AHV-1UL7截短重组蛋白的多克隆抗体，该多克隆抗体可作为检测AHV-1抗原的试剂应用且具有特异性，与鸭肝炎病毒、雏鹅新型肠炎病毒不产生交叉反应，还可以作为检测UL7蛋白在AHV-1感染宿主细胞中的定位和分布的试剂应用。