[发明专利]抗人β2微球蛋白的单域抗体及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及抗β2微球蛋白的抗体，特别涉及新的抗β2微球蛋白的特异性单域抗体，及其可变区的氨基酸序列和DNA编码序列，还涉及所述单域抗体的制备方法和用途。

背景技术

β2微球蛋白是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种小分子球蛋白，分子质量为11.8kDa，它是细胞表面人类淋巴细胞抗原(HLA)的β链(轻链)部分(为一条单链多肽)，广泛存在于血浆、尿液、脑脊液、唾液以及初乳中，含量很低。在健康人体内β2微球蛋白以相对稳定的速率合成，健康人群其血清浓度相对稳定，一般为1.5-3mg/l(Tilman B，et.al，Massy beta2-microglobulin progress in uremic toxin research，Seminars in dialysis200922,4,378–380)。在健康人体内β2微球蛋白合成的速率大约为2.4mg/kg/d。β2微球蛋白可以从肾小球自由滤过，99.9％在近端肾小管吸收，并在肾小管上皮细胞中分解破坏。某些疾病能使β2微球蛋白的合成增加。在晚期肾病病人的血清中其含量可以达到20-50mg/l，有时甚至会高达100mg/l。

β2微球蛋白在体内的浓度增高会导致透析相关性淀粉样变。1986年，Gejyo等发现腕管综合征患者体内局部有β2微球蛋白的沉淀，被称为β2微球蛋白相关的淀粉样变[Gejyo F et.al:Serum levels ofβ2-microglobulin as a new form of amyloid protein in patients undergoing long-term hemodialysis.The New England Journal of Medicine1986314:585-586]。其发病原因是由于血中β2微球蛋白的水平升高，部分β2微球蛋白的裂解产物提高了剩余β2微球蛋白的疏水性，导致剩余β2微球蛋白分子聚集，在各种组织中沉淀下来，进而引发一系列并发症。血液中β2微球蛋白浓度的检测及血液净化去除β2微球蛋白浓度对于预防透析相关淀粉样变等疾病的发生具有重要意义，β2微球蛋白特异性抗体由于其自身的特性在上述两方面领域具有良好的应用前景。

目前，检测β2微球蛋白的方法中使用的抗β2微球蛋白特异性抗体均为IgG。基于抗β2微球蛋白IgG的检测方法有免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫分析法、酶联免疫法、免疫荧光法[万瑛，熊锐华，β2微球蛋白与绿色荧光蛋白的融合蛋白及其制备方法和应用，公开号CN1O1481419A]、胶乳增强免疫透射比浊法[许国和，β2微球蛋白测定试剂盒，授权公告号CN202631545U]。IgG用于β2微球蛋白检测领域存在着如下缺陷:(1)较大分子量限制了抗体在基质表面的固载密度，也增加了抗体定向固载的难度，这限制了上述检测方法灵敏度的提高。(2)单克隆IgG难以大量制备，生产成本高，而多克隆IgG的结合能力不稳定。(3)IgG的Fc段容易与非靶细胞的Fc受体结合，影响检测结果。