[发明专利]细柱五加的离体快速繁殖方法

权利要求书

1.细柱五加的离体快速繁殖方法，其特征在于：

A外殖体消毒：选取腋芽饱满且尚未萌发的嫩枝，摘去叶片，然后将枝条剪为约2cm的小段，每段带一对腋芽，采用多方式消毒漂洗后，用无菌水冲洗4～6遍，最后用无菌滤纸吸干表面水分；

B腋芽诱导：将消毒好的细柱五加茎段切成1.0-1.5cm的带芽节段，接种到以下培养基中：WPM基本培养基，蔗糖20～40g/L，植物生长激素0.2～2.0mg/L，适当pH值下进行光照培养；

C腋芽培养：将腋芽萌发后培养20天左右的无菌苗茎尖用剪刀剪下，接种到以下培养基中：WPM基本培养基，蔗糖20～40g/L，植物生长激素0.2～2.0mg/L，适当pH值下进行光照培养；

D丛生芽诱导：将生长至8cm左右的芽苗切下，分成带有一对腋芽的小段：WPM基本培养基，植物生长激素0.5～1.0mg/L，进行光照培养30～40天；

E生根培养：选取健壮的试管苗，经过修剪后，在含植物生长激素400～500mg/L浸泡10-15min后接种到如下培养基中：1/2WPM或WPM基本培养基，蔗糖20～40g/L，进行光照培养50～60天。

F炼苗移栽：将组培瓶盖打开，并添加一定量蒸馏水进行有菌条件驯化一段时间；用镊子将组培苗从瓶中取出，移栽到已经灭菌的栽培基质中，进行遮阴驯化3周，期间不定期的喷施1/2WPM营养液。

2.根据权利要求1所述细柱五加的快速繁殖方法，其特征在于步骤A中的多方式消毒漂洗为：用0.1％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤15～20min，流水冲洗30～60min后，再在超净工作台上用75％的酒精漂洗30s，无菌水清洗4遍后，用含0.1％升汞灭菌50～60min。

3.根据权利要求1所述的细柱五加的快速繁殖方法，其特征在于步骤B、C、D、E中细柱五加快速繁殖所述的培养基中涉及的植物生长激素，包括6-卞基腺嘌呤(6-BA)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、赤霉素(GA₃)、反玉米素(ZT)、3-吲哚乙酸(IAA)、多效唑其中一种或几种。

4.如权利要求1所述细柱五加的快速繁殖方法，其特征在于步骤B、C、D、E中细柱五加快速繁殖所述的培养条件为：光照周期10～16h/d，光照强度1000～3000Lux，培养温度22～26℃。

5.根据权利要求1所述的细柱五加的快速繁殖方法，其特征在于步骤B、C中所涉及到的pH值范围为5.7～7.0。

6.根据权利要求1所述的细柱五加的快速繁殖方法，其特征在于步骤F中添加蒸馏水5～10ml，进行有菌驯化2-3天。

7.根据权利要求3所述的细柱五加的快速繁殖方法，其特征在于步骤B、C中所涉及到的植物生长激素包括吲哚丁酸(IBA)1.0～2.0mg/L，6-卞基腺嘌呤(6-BA)0.1～0.5mg/L，萘乙酸(NAA)0.1～0.2mg/L；

8.根据权利要求3所述的细柱五加的快速繁殖方法，其特征在于步骤D中所涉及到的植物生长激素包括反玉米素(ZT)0.5～1.0mg/L，吲哚丁酸(IBA)0.1～0.5mg/L。

9.根据权利要求3所述的细柱五加的快速繁殖方法，其特征在于步骤E中所涉及到的植物生长激素萘乙酸(NAA)0.1～0.2mg/L，多效唑5.0～10.0mg/L。