[发明专利]一种可视化检测抗原-抗体反应的方法及其应用

权利要求书

1.一种可视化检测抗原-抗体反应的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)抗原抗体反应：将酶标记的抗体加入到包被的待检测样品中，充分反应后洗涤去除未反应的酶标记抗体；

(2)酶催化底物反应：向步骤(1)反应体系中加入酶的底物，使酶和底物充分反应；

(3)可视化检测：向步骤(2)反应体系中加入二价铜离子和表面功能化的金纳米粒子，充分反应后根据反应体系颜色的变化判断样品中是否发生反应。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)之前还包括对待检测样品进行封闭的步骤；

优选地，所述封闭试剂为动物血清；进一步优选地，所述封闭试剂为胎牛血清；

优选地，所述封闭时间为30-120分钟，封闭温度为25-40℃；进一步优选地，所述封闭时间为60分钟；封闭温度为37℃。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述酶为辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)，优选为碱性磷酸酶(ALP)；

优选地，所述酶标记的抗体为一抗或二抗；

优选地，所述抗原-抗体反应的孵育时间为30-120分钟，孵育温度为25-40℃；进一步优选地，所述孵育时间为60分钟，孵育温度为37℃。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述酶的底物为磷酸化抗坏血酸、磷酸化柠檬酸、磷酸化抗坏血酸钠或磷酸化柠檬酸钠中的任意一种；优选为磷酸化抗坏血酸钠；

优选地，所述酶的底物浓度为1-500mM，优选为20mM；

优选地，所述酶与底物反应的时间为5-180分钟，优选为60分钟。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述二价铜离子为硫酸铜、硝酸铜或氯化铜中的任意一种，优选为硫酸铜；

优选地，所述二价铜离子的浓度为0.01-10mM，优选为0.5mM。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述加入的表面功能化的金纳米粒子为表面炔基功能化的金纳米粒子和表面叠氮基功能化的金纳米粒子的组合；

优选地，所述表面炔基功能化的金纳米粒子的炔基为包含化学式I的化合物：

优选地，所述表面叠氮基功能化的金纳米粒子的叠氮基为包含化学式II的化合物：

优选地，所述表面叠氮基功能化的金纳米粒子和表面炔基功能化的金纳米粒子的摩尔比为1：(0.5-2)，优选为1：1。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述反应体系的颜色变化在5-30分钟内出现，优选为10-15分钟。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述待检测样品包括临床检测样品；优选地，所述待检测样品为人抗肺炎支原体IgG。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法在生物医学和/或医学检验中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，将所述方法用于人抗肺炎支原体IgG的可视化检测。