[发明专利]一种肿瘤血管阻断剂多肽、基因、表达载体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗的药物技术领域，尤其涉及一种肿瘤血管阻断剂多肽、基因、表达载体及其应用。 

背景技术

肿瘤血管是肿瘤细胞获取营养物质及排除代谢产物的通道，也是肿瘤细胞逃逸、转移的重要途径之一，其形态学和功能都有别于机体的正常血管系统，因而是肿瘤靶向治疗的关键靶点之一。肿瘤血管靶向治疗主要包括两种模式：抑制新生血管生成和阻断已有肿瘤血管。其中阻断肿瘤已有血管疗法主要是通过选择性的破坏肿瘤已有的血管，切断肿瘤血供，诱发肿瘤细胞发生缺血性坏死，从而达到治疗肿瘤的目的。因此，如何实现特异的阻断肿瘤部位的血管，而对机体正常组织血管没有影响，成为研究的热点。 

组织因子(TF)是一个分子量约为47kDa的跨膜糖蛋白，在血栓形成过程中起重要的作用。正常情况下，组织因子位于血管壁外膜细胞，不存在于循环中或不与循环血液接触。当血管壁的完整性遭到破坏时，组织因子就会暴露于循环血液，通过激活凝固级联反应发挥止血作用。组织因子由263个氨基酸残基组成，其中氨基端的219个氨基酸残基位于细胞膜外，是组织因子的活性部位。研究表明，当该区域处于游离状态时，并没有凝血活性；但当它被锚定在细胞膜上，并暴漏于血液中时，则会产生类似于全长因子的凝血活性，因此该段序列被称之为截断的组织因子(tTF)。 

肿瘤靶向分子pHLIP是一种由35个氨基酸构成的多肽。当其在体内(pH＝7.35-7.45)循环时，处于自由伸展状态，并不能锚定于特定组织；但当其 到达肿瘤(pH＜7)部位时，则会产生酸响应的构象变化，形成α-螺旋结构，并与细胞膜发生相互作用，插入细胞膜中从而锚定于内皮细胞表面。 

发明内容

本发明的目的在于提出一种肿瘤血管阻断剂多肽，编码其的基因，表达其的表达载体以及其在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用；本发明的肿瘤血管阻断剂多肽的活性域——截断的组织因子tTF具有更接近天然的结构，因此具有更好的凝血活性，可以更有效地发挥肿瘤血管阻断作用。 

为达此目的，本发明采用以下技术方案： 

第一方面，本发明提供了一种肿瘤血管阻断剂多肽，该肿瘤血管阻断剂多肽从N端到C端依次包含：截断的组织因子tTF的氨基酸序列、连接子和肿瘤靶向分子pHLIP的氨基酸序列。 

作为优选，所述截断的组织因子tTF的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列(从N端到C端)如下： 

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE。 

SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列即为组织因子位于细胞膜外的氨基酸残基序列，当其处于游离状态时，没有凝血活性；当其通过靶向肽定位于肿瘤血管内皮细胞膜上时，则会发挥组织因子的功能，激活凝血途径，诱发血栓形成。 

优选地，所述肿瘤靶向分子pHLIP的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示； SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列(从N端到C端)如下： 

AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT。 

所述肿瘤靶向分子pHLIP在肿瘤部位的微酸性环境中能够产生构象变化，形成α-螺旋结构，并穿过细胞膜，从而定位于肿瘤血管内皮细胞膜。 

作为优选，所述连接子由4-8个、优选4-6个、更优选5个氨基酸构成； 

进一步优选地，所述连接子具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列(从N端到C端)如下：GGGGS。 

所述连接子能够使表达得到的融合蛋白活性域(即截断的组织因子tTF)和靶向域(即肿瘤靶向分子pHLIP)的功能保持完整。 

更进一步优选地，所述肿瘤血管阻断剂多肽具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列(从N端到C端)如下：