[发明专利]一株拟康氏木霉TZ-11菌株及其用途

权利要求书

1.一株拟康氏木霉菌株，其特征在于，该菌株的分类命名为拟康氏木霉TZ-11 (Trichoderma koningiopsis TZ-11)，该菌株已于2010年7月8号在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC No.3969。

2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，SEQ ID NO：1所示的为rRNA基因序列对应的DNA序列，该段rRNA包括了18S rRNA片段，ITS1、5.8S rRNA、ITS2区全序列及28S rRNA序列片段。

3.权利要求1-2所述的菌株在防治由围小丛壳菌(Glomerella cingulata)侵染引起的炭疽病病害方面的应用。

4.一种用权利要求1-2所述的菌株制备的可湿性粉剂。

5.一种制备根据权利要求4所述的可湿性粉剂的方法，其特征在于包括以下步骤：

(A)固体发酵培养物的获得

(1)将麦麸和锯木屑按3:7(V/V)的比例混匀后，分别加入0.1%(W/W)的蔗糖和碳酸铵，并加水使含水量为60~65%，pH调至7.5-8.0，再次混匀后在加厚的聚乙烯塑料袋内每袋分装1.5kg，扎紧袋口，并在121℃下湿热灭菌60 min；

在水平槽固体发酵盘底部铺垫2张灭菌报纸，加入灭菌后的固体发酵培养基1.5 kg，装料厚度约为5 cm；

将预先转接到PDA平皿中的拟康氏木霉TZ-11菌株，置于培养箱内28℃培养7d后，用无菌水洗下的孢子，用显微镜计数后将孢子液浓度调配为：1.0×10⁷个/mL；

将100mL该孢子液均匀接种到1.5 kg固体发酵培养基后，在发酵盘顶部盖2张灭菌报纸并用扎绳扎紧密封，最后放置于28℃保湿培养箱内发酵，发酵环境相对湿度达到80%以上，发酵8-10d，发酵产物活孢子量可达1.0-2.0×10⁹cfu/g；

(2)将上述发酵产物加入适量蒸馏水置于摇床上150rpm振荡洗涤8min，然后用325目标准筛过滤并收集滤液，反复3次，最后将滤液在3000rpm下离心15min，收集沉淀物备用；

(B)菌剂加工工艺

(1) 将经固体发酵、离心后收集到沉淀物用0.5%(W/W)甲基纤维素溶液悬浮，其中溶液用无菌水配制，并将悬浮液中活孢子的含量调节成≥5.0×10⁸ cfu/mL；

(2)将亚甲基二萘磺酸钠、十二烷基苯磺酸钙、轻质碳酸钙和硅藻土按5:4:1:90的重量比混合后，通过气流粉碎使细度达到325目以上，然后加入配制好的孢子悬浮液，最后经50℃气流烘干、搅拌机混匀和包装后加工成含拟康氏木霉TZ-11菌株活孢子的可湿性粉剂。

6.根据权利要求5中所述的可湿性粉剂的制备方法，其特征在于所述的拟康氏木霉TZ-11菌株活孢子含量≥1.0×10⁸cfu/g。