[发明专利]固相化的癌症靶标亲和柱、其制备和筛选方法及活性成分

说明书

技术领域

本申请涉及固相化的癌症靶标亲和柱、其制备方法和筛选方法及活性成分。

背景技术

肿瘤生成和转移受诸多因素的影响和制约，血管形成是其主要的因素之一。肿瘤血管形成是一个极为复杂的过程，需要一系列的调节因子发挥作用，其中作用最明确、研究最充分、备受重视的是VEGF。VEGF对肿瘤的影响机制可能有：1)促进肿瘤血管形成；2)促进肿瘤淋巴管生长；3)对肿瘤细胞的细胞动力影响；4)增强肿瘤细胞对放疗的耐受性及影响免疫功能。

VEGF是肿瘤血管生成的关键调控者，也是唯一表达于整个肿瘤生命周期的血管生成因子。把VEGF作为一种靶分子研制开发其拮抗剂，达到抑制肿瘤血管的新生、切断肿瘤血供、抑制肿瘤生长、发展及转移的目的，为肿瘤的治疗提供了一种新手段。当前，针对VEGF的肿瘤生物治疗已取得相当大的成绩。2004年2月26日，美国FDA批准了Genentech的贝伐珠单抗Bevacizumab(安维汀，Avastin)，一种抗VEGF的重组人源化单克隆抗体，用于治疗结直肠癌等。这是美国第一个获得批准上市、唯一在临床上使用的抗肿瘤血管再生药物，经体内、体外检测系统证实，Avastin能够同人类VEGF结合并阻断其生物活性，抗血管生成作用明显。图1显示了Avastin结合人类VEGF并阻断其生物活性，在正常情况下，血管生成主要通过VEGF和VEGFR-2的相互作用而介导；而Avastin可在胞外抑制VEGF，所以可抑制血管生成而不干扰VEGF通路以外的靶点。Avastin与标准化疗联用作为结肠直肠癌的一线、二线用药以及肺癌联合治疗的一线用药，在转移性结肠直肠癌、肺癌等治疗时的标准化疗联用效果显示可改善患者生存率。2006年，FDA批准了Genentech的另一个抗VEGF的重组人源单克隆抗体药物-Ranibizumab(Lucentis)上市，用于治疗老年性黄斑病变和结肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌。2011年，FDA批准了Sanofi和Regeneron合作的针对VEGF的新药-Aflibercept(VEGF Trap)，是一个由针对VEGF的人源单克隆抗体和VEGF受体1和2胞外部分组成的嵌合体(Chimera)，用于治疗一种老年性由血管生长异常导致的失明(Wet age-related macular degeneration，wet AMD)。同时，这个嵌合体已进入治疗肠癌和前列腺癌的三期临床研究。

因此，只要能够结合VEGF、抑制VEGF诱导的血管发生就能有效地控制癌症的转移和扩散。把VEGF作为一种靶向分子从天然药物中筛选能够与其相互作用的成分，有望筛选到其中的抗癌有效成分，对于研究天然药物的抗癌机理具有十分重要的意义，可以使天然药物的药理研究更加具有目的性，大大缩短新药的研发时间，加快新药的开发，减低新药的研发成本。

应明确指出的是，虽然上述内容在“背景技术”的标题下描述，但是并不代表申请人承认上述内容全部为现有技术。相反，为了引出本发明的发明内容，加入了发明人的分析和引申，因此这一部分不应被简单地视为现有技术。

发明内容

本发明中将明确参与癌症扩散过程的癌症靶标固相化到琼脂糖凝胶柱上制成亲和柱，从天然药物中捕捉能够与所述癌症靶标相互作用的化合物，为从天然药物中筛选潜在的抗癌有效成分大大地节约了时间和资金。

本发明的一个方面涉及制备固相化的癌症靶标亲和柱的方法，所述方法包括：琼脂糖凝胶装柱；将含所述癌症靶标的溶液加入所述凝胶柱中，固相化过夜制成亲和柱；固相化后，放出所述癌症靶标溶液，封闭所述亲和柱；洗涤所述亲和柱。

所述癌症靶标可为VEGF165蛋白质。

所述亲和柱可为琼脂糖凝胶亲和柱。

在一个实施方式中，所述琼脂糖凝胶亲和柱为NHS活化的琼脂糖凝胶亲和柱，所述癌症靶标为VEGF165蛋白质，并且每毫升所述NHS活化的琼脂糖凝胶上固相化的VEGF165的含量大于等于0.5mg。

本发明的另一个方面涉及使用上述方法制备的固相化的癌症靶标亲和柱。

所述癌症靶标可为VEGF165蛋白质。

所述亲和柱可为琼脂糖凝胶亲和柱。

在一个实施方式中，所述琼脂糖凝胶亲和柱为NHS活化的琼脂糖凝胶亲和柱，所述癌症靶标为VEGF165蛋白质，并且每毫升所述NHS活化的琼脂糖凝胶上固相化的VEGF165的含量大于等于0.5mg。

本发明的另一个方面涉及利用固相化的癌症靶标从天然药物中筛选潜在的抗癌症活性成分的方法，其中，使用所述固相化的癌症靶标亲和柱进行筛选。